超声联合微泡造影剂介导基因转染的体内外实验研究

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1、华中科技大学硕士学位论文超声联合微泡造影剂介导基因转染的体内外实验研究华中科技大学同济医学院附属同济医院超声影像科硕士学位申请者：胡良军指导教师：李开艳副教授摘要第一部分不同超声辐照时间和微泡剂量介导HepG2细胞基因转染的实验研究目的探讨不同超声辐照时间和微泡剂量与基因转染效率之间的关系，初步摸索适宜转染的参数条件。方法报告基因用增强型绿色荧光蛋白质粒（pEGFP），以人肝癌细胞（HepG2）2为研究对象。超声频率1MHz，声强0.5W/cm，对加入pEGFP和不同剂量微泡造影剂（MB）的HepG2细胞辐照不同时间。24h后

2、用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，流式细胞仪检测基因转染效率，台盼兰染色检测细胞存活率。结果各试验组均可见不同程度荧光蛋白表达，辐照时间为20s和微泡剂量为60μl时可达到较理想的转染效率。结论在超声频率和声强一定条件下，不同超声辐照时间和微泡造影剂剂量有不同的基因转染效率，20s、60μl是一个较理想的参数，为基因治疗进一步研究提供了参考。关键词超声检查；微气泡；转染；细胞系,肿瘤1华中科技大学硕士学位论文第二部分共聚物PluronicP85增强微泡造影剂介导基因转染的体内初步实验研究目的初步探讨静脉注射共聚物Pluro

3、nicP85和黏附质粒的微泡造影剂（MB），同时经体表给予一定强度的超声辐照，能否增强辐照部位局部组织的基因转染与表达。方法质粒DNA用绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。含有pEGFP转染液经尾静脉注入。实验分为3组，第一组：pEGFP+超声辐照（US）；第二组：pEGFP+MB+超声辐照（US）；第三组：pEGFP+MB+P85+超声辐照（US）。2脉冲多普勒超声辐照(1MHz，0.5W/cm)瘤组织，持续时间2min，7d后用活体荧光成像分析系统分析，然后取肿瘤组织快速冰冻切片，荧光显微镜计数EG

4、FP阳性的细胞，HE染色评价其组织损伤情况。结果第二组和第三组有较多的绿色荧光蛋白的表达，第一组绿色荧光蛋白表达较少，第三组表达量高于第一、二组，差异具有统计学意义（P<0.05），第二组表达量高于第一组，差异具有统计学意义（P<0.05）。HE染色肿瘤组织无坏死灶出现。结论初步得知共聚物PluronicP85可增强超声辐照微泡造影剂介导基因转染与表达，可能具有一定的协同作用，且对组织无损害，值得进一步关注和研究。关键词超声波；微泡造影剂；共聚物；基因转染；肝癌2华中科技大学硕士学位论文UltrasoundandMicrobu

5、bble：TheirFunctioninGeneTransfectioninVitroandinVivoDept.ofUltrasound,TongjiHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,WuhanCity430030Candidate:HuLiangjunTutor:Prof.LiKaiyanAbstractPart1UltrasonicExposure-timeandMicrobubble-dosage:TheirEf

6、fectonGeneTransfectioninHepG2CellsinVitroObjectiveToinvestigatetherelationshipofgenetransfectionefficiencywithdifferentultrasoundexposuretimeanddoseofmicrobubble（MB）mediatedgenetransfection，andtofindtheappropriateultrasoundparametersforgenetransfection．MethodsPlasmi

7、dencodingenhancedgreenfluorescentprotein（pEGFP）waschosenasthereportgeneandHepG2cellswaschosenastheresearchobject.TheHepG2cellsplus2pEGFPanddifferentdoseofmicrobubblewereexposedtoultrasound(1MHz,0.5W/cm)forvaryingtime.Aftertwenty-fourhours,theexpressionofEGFPinthecel

8、lswasobservedbyfluorescencemicroscope,thetransfectionefficiencywasassessedbyFACSandthecellviabilitywasdetectedbytrypanblueexclusion.Result