超声微泡介导野生型p53基因联合rb94基因转染裸鼠视网膜母细胞瘤的实验研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文超声微泡介导野生型p53基因联合Rb94基因转染裸鼠视网膜母细胞瘤的实验研究姓名：高睿骐申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：周希瑗201205超声微泡介导野生型p53基因联合Rb94基因转染裸鼠视网膜母细胞瘤的实验研究1摘要研究背景及目的视网膜母细胞瘤(RB)是学龄前儿童最常见的眼部恶性肿瘤，恶性度高，就诊时患儿较多已进入严重危害视力及生命的时期。目前我国对其治疗仍以患眼眼球摘除为主，辅以放射治疗、化学治疗、冷凝治疗等其他手段。而在对RB治疗的研究方面，基因治疗己成为其主要方向，其中又以对基因载体的研究，是其整

2、个领域的关键和瓶颈问题。近年来超声微泡造影剂成为基因载体研究的热点之一。Rb基因是公认的与RB形成关系最为密切的抑癌基因，而p53基因被认为目前的与人类恶性肿瘤相关性最高的一种抑癌基因。本研究以RB为研究对象，运用超声微泡造影剂这一新型载体，将wtp53基因及Rb94基因转染至裸鼠RB模型内，分别观察单个基因、联合基因对裸鼠视网膜母细胞瘤的治疗作用。研究方法：1．I-[XO-Rb44细胞培养于含IO％FBS的RPMll640培养基，待至对数期，收集并调整细胞密度为(5．5～6．5)×106／mL备用。40只裸鼠行双眼视网膜下注射Rb细胞悬

3、液lul，术后每3天观察肿瘤生长情况。2．将造模成功的裸鼠随机分为五组：①空白对照组；②空质粒组；1国家自然科学基金资助(30872826)2@p53质粒组；@Rb94质粒组：@p53+Rb94质粒。除组①外，其余四组每天以0．5W／era2超声波辐照眼球60s(辐照4s，间隔24s，连续两次，共用60s)，7天后取出肿瘤组织行RT-PCRflcWestern—blot证实转染是否成功。3．取转染后裸鼠肿瘤组织，用免疫组化染色及Western-blot法检测各组肿瘤组织VEGF表达，检测各组肿瘤组织的肿瘤微血管密度及组织细胞的凋亡情况。研

4、究结果：1．40只裸鼠双眼视网膜下种植瘤细胞，有32只裸鼠(48只眼)造模成功。2．RT-PCR及wB可见单基因组及联合基因组均有外源基因导入肿瘤组织，并在蛋白水平得到表达。3．对各组瘤组织的检测可见，单基因组及联合基因组对其VEGF、MVD及凋亡均有影响，但联合组的效应更为明显，同单基因组的差异有统计学意义(尸<0．05)。研究结论：超声微泡作为一种新型的转染介质，可达到转染单个基因及联合基因的目的，通过观察wtp53联合Rb94基因转染肿瘤组织后，对其的抑制作用优于单独转染其中任一基因，为RB的治疗提供更多、更有效的选择，也对RB发生

5、发展的机制研究拓展了新思路。关键词：超声微泡造影剂，wtp53基因，Rb94基因，视网膜母细胞瘤EXPERIMENTALRESEARCHOFWTP53ANDRB94GENETRANSFECTEDINTOTHERETINOBLASTOMAOFNUDEMICEBYULTRASOUND．TARGETEDMICROBUBBLEDESTRUCTIoNABSTI认CTBackgroundandObjectiveRetinoblastoma(RB)isthemostcommonmalignantintraoculartumorthatoccursinp

6、reschoolchildren．WhenthedoctorfoundmorechildrenhasenteredintotheseriousharIntovisionandlife．Thetreatmentofourcountryisophthalmectomy，complementarywithradiationtherapy,chemotherapy，cryotherapyandother，eta1．Thegenetherapy,especiallytheresearchonefficiencyandsecurityvectorof

7、targetedgene，becomesamainresearchfocusforitcanfundamentallysolvetheproblem．Inrecentyears，ultrasoundmicrobubblebecameanewresearchobjectsofgenetransporter．TheRbgeneisrecognizedthemostclostrelationswithtumorsuppressorgenestotheRBform,whileatpresentP53geneisrecognizedatumor．s

8、uppressorgeneswiththehighestcorrelationtothehumanmalignanttumor．Inourstudy,theRBastheresearchobj