rnai沉默vegf表达对大肠癌细胞肝转移的影响

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1、RNAi沉默VEGF表达对大肠癌细胞肝转移的影响作者：王崇强，范钰，徐永中，庞利群【摘要】目的：研究血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）对大肠癌肝转移的影响。方法：根据VEGF基因mRNA设计合成小干扰RNA，采用荧光实时定量PCR检测VEGFmRNA水平，分别以软琼脂集落培养试验和Boyden模型观察癌细胞锚着不依赖性增殖和癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立大肠癌肝转移模型，以不同方法处理的癌细胞接种模型，观察对大肠癌细胞肝转移的影响。结果：转染组VEGF基因mRNA水平明显降低，且呈浓度和时间依赖性。经VEGFsiRNA转染处理的

2、癌细胞软琼脂集落形成数和穿膜细胞数明显减少，且呈浓度依赖性（P<0.05，P<0.05）。体内试验发现，对照组10只全部出现大肠癌肝转移灶，而siRNA组仅仅1只出现肝转移，差异具有显著统计学意义（P<0.01）。结论：VEGF基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用；以RNAi技术沉默VEGF基因表达，可抑制大肠癌细胞肝转移。【关键词】肠肿瘤；　肝转移；血管内皮生长因子；RNA干扰　　［Abstract］Objective:Tostudytheeffectsofvascularendothelialgrowthfactor（VEGF）onlivermetastasis13

3、ofcoloncancer.Methods：AfterhumancoloncancercelllineLS174TweretransfectedbyVEGFsmallinterferingRNA（siRNA）,themRNAlevelwasdeterminedbyrealtimeRTPCR.Theanchorageindependentgrowthwasexaminedusingcloneformationinsoftagar,andinvasionabilitywasevaluatedbyboydenchambermodel.Thirtynudemicemodelofcolore

4、ctalcancerlivermetastasiswasestablishedbysplenectomy.Results：VEGFsiRNAcaninhibitanchorageindependentgrowthandinvasionabilityinvitro,andreducelivermetastasisofcoloncancerinvivo.Conclusion：VEGFsiRNAcaninhibitlivermetastasisofcoloncancer.　　［Keywords］coloncarcinoma；livermetastasis；　vascularendothel

5、ialgrowthfactor；　RNAinterference　　肿瘤血管生长是肿瘤生长和转移的基础。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是一个强有力的促血管生成因子，在与血管内皮细胞增生相关的生理和病理过程中起重要作用，特别是与实体瘤的关系密切［1］。许多学者发现，VEGF高表达与癌细胞侵袭、转移密切相关［2，3］。大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，被发现时大多数已有转移。有研究报道，大肠癌细胞中VEGF表达增加［4］，且与肝转移具有一定的关系［5］。但国内相关研究较少。13　　本研究借助于小干扰RNA（smallinterfer

6、ingRNA，siRNA）介导的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术，采用VEGF基因siRNA转染处理大肠癌细胞LS174T，从体内外观察了对癌细胞侵袭和肝转移的影响。现报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料　　人大肠癌低分化腺癌细胞株LS174T由中国科学院上海细胞所细胞库从美国ATCC引进并提供，肿瘤细胞常规在含体积分数为10%胎牛血清RPMI1640培养液中培养。针对VEGFsiRNA的正义链为：5′GGAGUACCCUGAUGAGAUCdTdT3′。错配siRNA序列（正义链：5′UUCUCCGAACGUGUCACGUTdTd3′；反义链：

7、5′ACGUGACACGUUCGGAGAATdTdT3′）。均由美国Dharmacon公司合成。Trizol,RNaseinhibitor、反转录酶SSRTⅡ,Taq酶和转染试剂Oligofectamine购自美国Invitrogen公司。Balb/c裸鼠，30只，雌性，4周龄，体质量约14～18g，购自中国科学院上海生物化学研究所，于无特殊病原体条件(SPF)下饲养。　　1.2细胞培养及转染处理13　　大肠癌LS174T细胞在含10％胎