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《rnai沉默smad4基因表达对人前列腺癌细胞增殖的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、RNAi沉默Smad4基因表达对人前列腺癌细胞增殖的影响吴开杰1，张栋1，曾津1，薛艳2，薛玉泉1，王蓉3，王新阳1，贺大林1（西安交通大学医学院第一附属医院：1泌尿外科，2肿瘤中心，3影像中心，西安710061)摘要：目的观察RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对人前列腺癌细胞增殖能力的影响，探讨Smad4在前列腺癌恶性进展中的作用。方法用半定量RT-PCR和Western蛋白印记方法检测LNCaP、PC-3、DU145以及ARCaP亚细胞系IF11、IA8等多种不同前列腺癌细胞Smad4mRNA及蛋白表达的情况，筛选出Smad4基因阳性表达的细胞；针对Smad4基因不同部位设计
2、并化学合成三对不同的靶向小干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA)，脂质体介导瞬时转染阳性表达Smad4的细胞，转染后48h分别用RT-PCR和Western蛋白印迹检测Smad4mRNA及蛋白表达水平的变化，用MTT法检测沉默Smad4表达对细胞增殖的影响；结果检测的5种前列腺癌细胞中仅LNCaP、PC-3、DU1453种细胞表达Smad4mRNA及蛋白；选择PC-3细胞做siRNA转染，与阴性对照序列组（siRNA-NC）相比，转染48h后，转染SiRNA1、SiRNA2、SiRNA3的3组PC-3细胞的Smad4mRNA表达水平均显著下降，但仅有siR
3、NA3组Smad4蛋白表达水平显著降低。转染SiRNA3沉默Smad4基因表达后PC-3细胞的体外增殖能力显著增强（P<0.05）；结论不同前列腺癌细胞Smad4基因的表达存在差异，靶向siRNA下调Smad4的表达可增强前列腺癌细胞的增殖能力。关键词：前列腺癌；肿瘤进展；RNA干扰；Smad4中图法分类号：R737.25；R730.231；文献标识码：AEffectofSmad4GeneSilencingbySmallInterferingRNAontheProliferationofProstateCancerCellsinVitro.WUKai-jie1,ZHANGDong1
4、,ZENGJin1,XUEYan2,XUEYu-quan1,WANGRong3,WANGXin-yang1,HEDa-lin1，*（1UrologyDepartment,2CenterofOncology,3CenterofRadiology,theFirstAffiliatedHospital,MedicalSchoolofXi’anJiaotongUniversity,Xi’anShaanxi,710061,China）Abstract:ObjectiveToexploretheeffectofSmad4genesilencingbysmallinterferingRNA(si
5、RNA)ontheproliferationofprostatecancercellsinvitro.Methods:ExpressionofSmad4geneinseveralprostatecancercelllines(LNCaP、PC-3、DU145、IF11、IA8)wasdetectedbysemiquantitativereversetranscription-PCR(RT-PCR)andWesternblottingtoselectthepositivecells.ThreesiRNAtargetingthreedifferentdomainsofSmad4gene
6、weredesigned,synthesizedandtransfectedintoSmad4-postivecellsbyLipofectamineTM2000.Aftertransfectionfor48h,expressionofSmad4geneinSmad4-postivecellswasdetectedbyRT-PCRandWesternblottingagain,andtheproliferativepotencywasalsoanalyzedbyMTTassayatthesametime.ResultsTherewasaremarkabledifferenceint
7、heexpressionofSmad4mRNAandproteinbetweenthesecells,Smad4washighlyexpressedinLNCaP,PC-3andDU145cells,butnotexpressedinIF11andIA8cells.Comparedwithnegativecontrol(siRNA-NC)groups,TransfectionofthreetargetingsiRNAinPC-3cellsallsignificantl
