rnai沉默plk1对胰腺癌细胞系aspc-1侵袭转移的影响

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1、论著中国医药导报2013年l2月第l0卷第35期RNAi沉默Plkl对胰腺癌细胞系AsPC-1侵袭转移的影响喻春钊余翔王兴伟骆霞岗李泉竺慧王伟林南京医科大学第二附属医院普通外科．江苏南京210011【摘要】目的探讨RNAi沉默Plk1基因表达与胰腺癌细胞侵袭转移能力的关系。方法根据Plk1基因特点，设计并用化学方法合成了4个小干扰核糖核酸分子(siRNA)(shplkl一1、shplkl一2、shplk1—3、shplkl一4)，脂质体转染法将短链siRNA转入AsPC—l细胞；细胞分为：未处理组为对照组、空质粒组、shplkl

2、一1组、shplkl一2组、shplk1—3组、shplkl一4组。采用RT—PCR和Westernblot法检测siRNA对P1k1表达的抑制效果；采用Transwell法检测转染后细胞侵袭能力：采用划痕实验检测转然后细胞迁移能力。结果RT—PCR和Westernblot结果示所设计的4个siRNA均能明显抑制AsPC—l细胞Plk1mRNA水平，以shplkl一3效果最好，与对照组、空质粒组及其他三组比较，转染shplkl一3组PlklmRNA和蛋白的表达水平显著降低(P<0．01)；以转染shplkl一3处理AsPC一1细

3、胞后与对照组、空质粒组比较，Transwell侵袭实验证实：细胞转染24h后，正常对照组、空质粒组和shplkI一3组穿过人工基底膜的侵袭细胞数分别为(195~16)、(176~13)、(83~5)个，侵袭能力明显降低，差异有高度统计学意义(P<0．01)；细胞划痕实验证实：shplkl一3组迁移能力明显降低。结论抑制胰腺癌细胞P1k1基因，侵袭迁移能力明显降低，能够为胰腺癌的治疗提供新的策略。【关键词]Plkl；l：kNAi；胰腺癌；侵袭；转移【中图分类号】R735．9【文献标识码]A【文章编号】1673—7210(2013)

4、12(b)一0004—04InfluenceofPlklblockingwithRNAiininvasivenessandmetastasisinpancreaticcarcinomacellline0fAsPC一1YUChunzhaoYUXiangWANGXingweiLUOXiagangLIQua,,ZHUHuiWANGWeilinDepartmentofGeneralSurgery，theSecondAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity，JiangsuProvince，N

5、anjing210011，China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheregulatoryroleofpolo-likekinase-1(Plk11geneintheinvasionandmigrationofpancreaticcancercells．Methods4smallinterferingRNAs(siRNAs)(shplkl一1，shplkl一2，shplk1—3，shplkl-4)targetingPlklgeneweredesignedandsynthesizedaccord

6、ingtoPlklmRNAsequence．Thecellsweredividedintocontrolgroup，emp—typlasmidgroup，shplkl一1group，shplkl一2group，shplkl一3groupandshplkl-4group．AftertransfectionofAsPC一1cellswiththesiRNAs，real—timeRT—PCRandWesternblottingwereperformedtoexaminethechangesinPlklgeneexpressionint

7、hecells．Transwellassaywasusedtoexploretheinvasionabilityofthecells．,Cellmigrationwasassessedbyawoundhealingassay．ResultsRT-PCRandWesternblotresultsshowedthatallthe4siRNAswerecapableofsuppressingPlklmRNAex—pressioninAsPC-1cells，amongwhichtheAsPC~1siRNAhadthestrongeste

8、ffect，thedifferenceswerestatisticallysignifi—cant<0．o1)．Thetranswellandthewoundhealingassaysshowedthatthemigratoryandinvasivecapaci