雷公藤脚基焦磷酸合酶基因twgpps克隆与表达分析

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1、雷公藤脚6基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析关键字：雷公藤脚6基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析本文为Word文档，感谢你的关注！　　[摘要]根据雷公藤悬浮细胞转录组数据设计特异引物，采用cDNA末端快速扩增技术克隆雷公藤�脚６�基焦磷酸合酶基因TwGPPS1，TwGPPS2全长cDNA，并进行生物信息学分析和蛋白表达研究。首次克隆得到TwGPPS1核苷酸的完整开放阅读框长度为1278bp，编码425个氨基酸蛋白，预测蛋白等电点为668，相对分子质量为47189kDa；TwGPPS2核苷酸的完整开放阅读框长度为1269bp，编码422个氨基酸蛋白，预测蛋白等

2、电点为671，相对分子质量为46774kDa；进一步构建了原核重组表达载体pET32aTwGPPS1，pET32aTwGPPS2，并成功诱导出TwGPPS1，TwGPPS2重组蛋白，为深入研究此关键酶基因功能和雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。　　[关键词]雷公藤；�脚６�基焦磷酸合酶；克隆；生物信息学分析；蛋白表达　　Cloningandproteinexpressionanalysisofgeranyldiphosphatesynthase　　genesinTripterygiumwilfordii　　TULichan1，ZHANGYifeng1，2，SUPing1，2，

3、HUTianyuan1，TONGYuru1，2，GUANHongyu1，2，　　ZHAOYujun2，ZHANGXianan1，YUANYuan2*，GAOWei1*，HUANGLuqi2　　（1SchoolofTraditionalChineseMedicine，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China；　　2StateKeyLaboratoryofDaodiHerbs，NationalResourceCenterforChineseMateriaMedica，　　ChineseAcademyofChineseMedical

4、Sciences，Beijing100700，China）　　[Abstract]Basedonthetranscriptomedata，thestudyclonedfulllengthcDNAofTwGPPS1andTwGPPS2genesfromTripterygiumwilfordiisuspensioncellsandthenanalyzedthebioinformationofthesequenceandproteinexpressionTheclonedTwGPPS1hasa1278bpopenreadingframe（ORF）encodingapolypept

5、ideof425aminoacidsThededucedisoelectricpoint（pI）was668，acalculatedmolecularweightwasabout47189kDa.ThefulllengthcDNAoftheTwGPPS2containsa1269bpopenreadingframe（ORF）encodingapolypeptideof422aminoacidsThededucedisoelectricpoint（pI）was671，acalculatedmolecularweightwasabout46774kDaTheentireread

6、ingframeofTwGPPS1，2wasclonedintothepET32a（+）vectorandexpressedinE.coliBL21（DE3）cellstoobtaintheTwGPPSprotein，whichlaidabasisforfurtherstudyontheregulationofterpenoidsecondarymetabolismandbiologicalsynthesis.　　[Keywords]Tripterygiumwilfordii；geranyldiphosphatesynthase；cloning；bioinformatics

7、analysis；proteinexpression　　雷公藤TripterygiumwilfordiiHookf�槲烂�科雷公藤属木质藤本植物。作为一种传统中药，其味辛、苦，性寒，化学成分复杂，具有祛风除湿、消肿活血、通络止痛、解毒杀虫的功效，被广泛用于治疗肾小球肾炎、红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病及多种皮肤病，同时雷公藤也可作为农药用以杀虫、毒鼠、灭螺等，是目前国内外研究的热点天然药物之一[12]。现雷公藤已分离出200多种单体化合物，其中，具有生物活性的主要是倍半萜类（包括倍半萜生物碱类）、二萜类、