肿瘤转移抑制基因kai1-cd82在顺铂作用下的卵巢癌细胞中表达的变化论文

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1、肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在顺铂作用下的卵巢癌细胞中表达的变化论文韩秋峪陆晓媛闫洪超【摘要】目的研究顺铂（cDDP）作用下人卵巢上皮性癌细胞株3AO中肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82的表达的变化，初步探讨其作用机制。方法采用倒置显微镜观察cDDP作用后3AO细胞形态学的变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察cDDP对细胞增殖的影响；运用免疫细胞化学方法检测不同浓度cDDP(1、3、9mg/L3个浓度组)作用的3AO细胞株中KAI1/CD82表达情况,并与细胞对照组（未经药物处理）进行比较。结果cDDP作用后细胞体积缩小、细胞内颗粒增多，细胞核固缩、深染，细胞凋亡；cDDP对3AO

2、细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖关系；cDDP作用后卵巢癌细胞中KAI1/CD82基因的表达较对照组明显增强。结论cDDP不仅能增加对卵巢癌细胞的生长抑制率，而且能上调卵巢癌细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82的表达，为临床上药物抑制肿瘤转移的深入研究提供了有利的实验依据。【关键词】卵巢肿瘤；肿瘤转移抑制基因；KAI1/CD82；卵巢上皮性癌细胞3AO；顺铂Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofcisplatin(cDDP)onvariationsoftheexpressionofmetastasissuppressorgeneKAI1

3、/CD82inhumanovarianepithelialcancercellline3AOandtomakeapreliminarystudyofthemechanismofcDDP.MethodsFolloinistration,the3AOcellsorphologicallybyinvertedmicroscopy.Methylthiazolyltetrazolium(MTT)assayployedtoobservetheeffectsoncellularproliferation.Ag/L,3mg/Land9mg/L)munocytochemistry(ICH)andtomak

4、eparisonsberincreased,resultinginnuclearpyosis,deep-stainingandcellapoptosis.MTTassaydemonstratedthatcDDPcouldpartiallyinhibitthegroarkeddose-dependenttendency.TheKAI1/CD82proteinexpressionindifferent3AOcellstreatedanovariancancercellline，butalsocouldeffectivelyup-regulateKAI1/CD82expressioninhum

5、anovariancancercellline,entalevidenceforclinicalchemotherapyfortumormetastasis.Keys;tumormetastasissuppressorgene;KAI1/CD82;ovariancancercellline3AO;cisplatin卵巢上皮性癌在所有的妇科恶性肿瘤中具有较高的病死率，其5年生存率始终徘徊在30%左右.freelericanTypeCultureCollection），由徐州医学院附属医院中心实验室冻存。细胞复苏后培养于含10%新生小牛血清、100kU/L青霉素、100kU/L链霉素的RPM

6、I-1640培养液中，在37℃、5%CO2培养箱中培养并传代。1.1.2试剂RPMI-1640细胞培养基为GibcoBRL公司产品。二甲基亚砜（DMSO）及四甲基偶氮唑蓝（MTT）为Sigma公司产品。新生小牛血清为杭州四季青公司产品，使用前经56℃灭活30min，置于-20℃冰箱内保存备用。cDDP注射液为贵州汉方制药有限公司产品，相对分子质量为300.05，剂型规格为每50ml注射液含50mgcDDP及450mg氯化钠；鼠抗人KAI1/CD82单克隆抗体为NeoMarkers公司产品，购于深圳晶美生物工程有限公司。SP免疫组织化学试剂盒购于福建迈新生物工程有限公司。1.2方法1.2.

7、1细胞的药物处理将cDDP注射液用生理盐水溶解成0.05g/L的储存液，-20℃避光保存。根据临床化疗使用cDDP的血药浓度，处理细胞的cDDP浓度梯度分别为1mg/L、3mg/L、9mg/L。1.2.2倒置显微镜下观察不同浓度cDDP作用后细胞形态变化取对数生长期的3AO细胞常规传代培养于25cm2培养瓶中，2～3天换液1次，待长至60%融合时，分别加入含上述3种浓度药物的RPMI-1640小牛血清培养液5ml，对照组为不含药物的