香烟烟雾提取物对人红细胞膜的损害作用论文

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1、香烟烟雾提取物对人红细胞膜的损害作用论文孙学敏，张献清，严向阳，杨建雄，曾成鸣【摘要】目的：以人红细胞为模型,评估香烟烟雾提取物（CSE）对生物膜的损害作用.方法：以市售香烟提取CSE,然后作用于红细胞，通过测定细胞溶血率、膜脂质过氧化水平、细胞内高铁血红蛋白以及还原谷胱甘肽含量、膜磷脂组成和膜蛋白谱变化等指标,对CSE导致的红细胞膜损害进行评估.结果：香烟烟雾水溶物CSE可导致红细胞溶血,红细胞丙二醛和高铁血红蛋白水平升高,谷胱甘肽含量降低.并且能够改变膜磷脂组成和诱导膜蛋白聚集.结论：香烟烟雾水溶物对红细胞具有氧化损害

2、作用,这种损害作用可进一步导致红细胞丧失其正常生理功能.【关键词】红细胞；香烟烟雾提取物；溶血；还原谷胱甘肽；高铁血红蛋白；膜蛋白质类【Abstract】AIM:Toevaluatetheoxidativedamagesofcigarettesmokeextract(CSE)tohumanerythrocytemembrane.METHODS:TheoxidativedamagesoferythrocyteinducedbyCSEicalassaysofmalonaldehyde(MDA),methemoglobin(Me

3、tHb)andreducedglutathione(GSH)levels,hemolyticrate,SDSPAGEofmembraneproteinsandchromatographicanalysisofmembranephospholipids.RESULTS:TreatmentoferythrocytesolysisandtheformationofMDAandMetHb,decreasedGSHlevelandchangedthepatternsofmembraneproteinsandphospholipid

4、s.CONCLUSION:CSEinducestheoxidativedamagesofhumanerythrocytes,thusresultinginthelossofphysiologicalfunctionsofhumanerythrocytes.【Keyokeextract;hemolysis;reducedglutathion;methemoglobin;membraneproteins0引言大量证据表明抽烟可以诱发诸多人类疾病［1］.虽然对此已经进行了大量的研究，但对其确切的作用机制仍然不是很清楚.在香烟烟雾

5、对机体毒性作用中，氧化活性产物和活性氧分子造成细胞膜氧化损伤是其中的一个重要环节.这种损伤可激活机体内的毒性化学通路.freelokeextract,CSE)导致的溶血，细胞膜蛋白、脂质过氧化水平和还原谷胱甘肽含量改变,以及对膜磷脂构成的影响,以评估香烟烟雾对细胞膜的氧化损害作用,为抽烟的致病机制提供分子水平上的依据.1材料和方法1.1材料BCA蛋白浓度测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品，磷脂色谱标准品和电泳试剂购自Sigma公司，蛋白酶抑制剂（PMSF）购自Serva公司.其他均为国产分析纯试剂.3K30型冷冻离心

6、机（美国Sigma公司）,TU1800型紫外可见分光光度计(北京普析公司),GDS8000凝胶成像系统(美国UVP公司)，MiniVE型垂直电泳槽(瑞典Amersham公司),1100LC型高效液相色谱系统（Aglient公司），QP2010型气相色谱－质谱联用仪（日本Shimadzu公司）.1.2方法1.2.1红细胞分离健康人新鲜全血由陕西省西安市红十字血液中心提供.分离时,取新鲜全血10mL，在4℃,750g条件下离心10min,用玻璃吸管小心地吸去血浆和沉积红细胞表面的一层白色膜状物,得到的红细胞用预冷的等渗磷酸

7、盐缓冲液（PBS:138mmol/LNaCl,6.1mmol/LNa2HPO4,1.4mmol/LNaHPO4,pH7.4）洗涤后再离心.重复3次,然后与PBS配制成一定浓度的红细胞悬液备用.1.2.2香烟烟雾提取物CSE的制备点燃香烟（市售，焦油含量15mg/支），用50mL注射器手工抽取烟雾,香烟燃烧速度约为1min/支，迅速注入PBS溶液中（1mL/支），经0.22μm微孔滤膜过滤后立即使用.1.2.3生化指标分析用CSE溶液与红细胞悬液混合,37℃孵育40min,然后用冷的等渗溶液洗涤,并稀释至所需浓度（脂质过氧化

8、指标采用30mL/L红细胞悬液,其他指标采用的红细胞浓度均为33mL/L）.红细胞溶血测定：将经过CSE处理过的红细胞加入到等渗溶液中.室温孵育30min后,离心取上层液,540nm下测定A值,以等渗溶液为空白对照,低渗条件下红细胞完全溶血的吸收值为100%,计算红细胞的溶血率.根据文献［4］的方法测定