γ射线辐照对β淀粉样肽诱导红细胞膜损害的作用论文

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1、γ射线辐照对β淀粉样肽诱导红细胞膜损害的作用论文曹媛,张献清，齐浩,曾成鸣【摘要】目的：研究γ射线辐照对β淀粉样肽(Aβ)诱导的红细胞膜损害的保护作用.方法：红细胞经50Gy和100Gyγ射线照射后，再用Aβ处理，分别用分光光度法测定红细胞溶血率和渗透脆性；扫描电镜观察细胞形态；1,6二苯基1,3,5己三烯（DPH）荧光探针标记检测细胞膜流动性.结果：γ射线辐照可抑制红细胞的自然溶血和Aβ导致的溶血，但只有100Gy辐照的差异具有统计学意义（P0.05），使自然溶血率和Aβ引起的溶血率

2、由（3.76±0.50）%，（11.90±1.50）%分别降至（1.87±0.09）%和（7.90±0.90）%.50Gy和100Gy的辐照均可降低Aβ引起的细胞变形程度，增加细胞膜的流动性（P0.05）.freelmol/L分别降至80.7mmol/L和76.9mmol/L.结论：在本实验条件下，γ射线辐照可降低Aβ对红细胞膜的损伤，并可增加红细胞膜的流动性及稳定性.【关键词】γ射线；淀粉样β蛋白；红细胞；溶血；膜流动性0引言低剂量γ射线辐照（1Gy）可刺激机体的免疫功能，提高机体的抗病能力［

3、1］.目前，临床上常用15~35Gy的γ射线对血液进行辐照，灭活血液中的淋巴细胞，以预防输血相关的免疫疾病［2］.该剂量范围的γ辐射对血液中的其他成分也可产生一定的影响［3-4］.红细胞在经400Gy辐照后，短时间内可增加细胞的稳定性［5］.本研究采用小于100Gy的γ射线处理红细胞，以β淀粉样肽（βamyloidpeptide,Aβ）诱导红细胞膜损害为实验模型，研究此剂量范围的辐射对红细胞某些性质的影响，以及对Aβ的细胞毒性的作用.1材料和方法1.1材料新鲜全血取自健康志愿者，枸醛酸抗凝；

4、Aβ和荧光探针1,6二苯基1,3,5己三烯（diphenylhexatriene,DPH）（美国SigmaAldrich公司）；其它试剂均为国产分析纯.1240型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；LS55型荧光分光光度计（美国PerkinElmer公司）；3k30型冷冻离心机（美国Sigma公司）；GammacellR1000型血液辐照仪(加拿大Nordian公司)；Quanta200型环境扫描电镜（荷兰PhilipsFEI公司）.1.2方法1.2.1红细胞的制备和辐照处理取新

5、鲜全血750g，4℃离心10min，吸去上层血浆和白细胞，并用等渗PBS（150mmol/LNaCl，2.7mmol/LKCl，10mmol/LNa2HPO4，2mmol/LNaH2PO4，pH7.4）洗涤3次,制备成200mL/L细胞悬液，然后用γ射线照射，照射剂量分别为0，50和100Gy.1.2.2红细胞溶血率的检测照射过后的红细胞悬液用等渗PBS稀释至20mL/L，加入Aβ使其终浓度为5mg/L，37℃水浴30min后取出，750g，4℃离心10min，取上清，540nm处测出吸光度值A

6、1；沉积红细胞用蒸馏水全溶血后离心，用同样方法测得吸光度值A2.按下式计算溶血率：溶血率（%）=A1/（A1+A2）×100%.1.2.3扫描电镜观察红细胞形态处理过的红细胞经终浓度为10g/L戊二醛固定，用500，700，900，1000mL/L丙酮系列脱水，喷金后进行扫描电镜观察.1.2.4红细胞的渗透脆性测定红细胞分为未照射组，50Gy照射组和100Gy照射组.配制不同渗透压的PBS，其中NaCl的浓度为0~135mmol/L，在上述PBS中分别加入各组红细胞悬液，细胞终浓度为2mL/L，

7、37℃水浴30min，取出后以1.3.2中的方法分别测溶血率，以NaCl浓度分别为135mmol/L和0mmol/L的PBS为对照和全溶血对照，计算50%溶血时的NaCl浓度.1.2.5红细胞膜流动性的检测用四氢呋喃作溶剂配制2×10-3mol/L的DPH储存液,于棕色瓶中4℃低温保存.工作液浓度为5×10-5mol/L,.freelL/L浓度，与DPH工作液等体积混合，于37℃水浴孵育45min后，检测偏振荧光（激发光波长为362nm，发射光波长为450nm）.统计学处理：用SPSS10.0统

8、计软件进行处理，实验数据以x±s表示，多个样本均数比较采用方差分析及t检验.2结果2.1红细胞的溶血率在未经辐照处理的情况下，等同实验操作可使红细胞发生少量溶血（溶血率4%），而在红细胞经γ射线照射后，自然溶血率随着辐照增加而降低，在100Gy时自然溶血率由（3.76±0.50）%降至（1.87±0.09）%，差异具有统计学意义（P0.05）.加入Aβ后可导致红细胞溶血率增高至（11.90±1.50）%（P0.01），红细胞经γ射线照射后，Aβ导致的溶血作用降低，50Gy照射组虽低于对照组，但差