香烟烟雾提取物对大鼠股四头肌细胞氧化损伤的研究-论文.pdf

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1、国际呼吸杂志2014年7月第34卷第13期IntJRespir，July2014，Vo1．34，No．13·1OO5·．论著．香烟烟雾提取物对大鼠股四头肌细胞氧化损伤的研究杨士芳高兴林吴健李静【摘要】目的研究经香烟烟雾提取物(CSE)刺激后大鼠股四头肌细胞8一羟基脱氧鸟苷(8一OHdG)含量的变化以及细胞内活性氧(ROS)水平和8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)表达对8-OHdG含量变化的影响。方法用不同浓度CSE分别刺激大鼠股四头肌细胞24h、48h和72h后，采用高效液相色谱一电化学法(HPLC—ECD)检测大鼠股四头

2、肌细胞8一OHdG的含量，流式细胞术检测大鼠股四头肌细胞R0s水平，实时定量PCR(RealtimePCR)检测0GG1mRNA水平，用Westernblot检测0GG1蛋白水平。结果经相同CSE浓度分别刺激大鼠股四头肌细胞24h、48h和72h后，大鼠股四头肌细胞中8一OHdG含量、ROS水平及OGG1mRNA和蛋白水平差异均无统计学意义。但经不同浓度CSE刺激相同时间后，1O．。0％CSE和2O．O0CSE刺激组大鼠股四头肌细胞8—0HdG含量明显高于对照组和5．。0CSE刺激组(P

3、、OGG1tuRNA和蛋白水平较对照组均明显升高(P<0．05)；大鼠股四头肌细胞8—0HdG含量与其ROS水平呈明显正相关(r一0．746，P一0．000)；经CSE刺激后，大鼠股四头肌细胞OGG1mRNA和蛋白水平均高于对照组(P<0．05)，但大鼠股四头肌细胞8—0HdG含量与其CIGG1mRNA和蛋白水平无明显相关(r一0．392，P一0．536；r一0．297，P一0．426)。结论CSE刺激可引起大鼠股四头肌细胞8—0HdG升高，8一OHdG含量与R0S水平有关，但与其修复酶OGG1表达水平无明显相关。【关键词】慢性

4、阻塞性肺疾病；骨骼肌功能障碍；8-羟基脱氧鸟苷；8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1StudyonoxidativedamageofratquadrieepsfemorismuscleinducedbycigarettesmokeextractYangShifang，GaoXinglin，WuJian，LiJing．DepartmentofRespiratoryDiseases，GuangdongGeneralHospital(GuangdongAcademyofMedicalSciences)，GuangdongInstituteof

5、Geriatrics，Guangzhou510080，ChinaCorrespondingauthor：GaoXinglin，Email：xinglingao~hotmai．corn[Abstract]0bjectiveTostudytheeffectofcigarettesmokeextract(CSE)onthequadricepsfemorismusclecellsofratin8-hydr0xydeoxyguanine(8-OHdG)contentandtherelationshipbetween8-OHdGconten

6、tandlevelofreactiveoxygenspecies(ROS)and8-oxoguanineDNAglycosylase一1(OGG1)．MethodsThequadricepsfemorismusclecellsofratswerecultured，whichwerestimulatedbyCSEaccordingtodifferenttimeandconcentration．8-OHdGwasdetectedbyhighpressliquidchromatographywithelectrochemicaldet

7、ection(HPLC-ECD)．ThelevelofROSwasdeterminedbyfluorescentprobeof2，7一dichlorodihvdrofluoresceindiacetate(DCFH—DA)．TheexpressionofOGG1mRNAwastestedbyRealtimePCR．TheexpressionofOGG1proteinwastestedbyWesternblot．ResultsTherewasnon—significantdifferencebetweenthe8-OHdG，ROS

8、，OGG1mRNAandproteinlevelinthedifferenttime．However，the8-OHdGcontentofthequadricepsfemorismusclecellsinducedby10．00CSEand20．O0CSEwas