香烟烟雾对人气道平滑肌细胞增殖和凋亡失衡影响及机制的研究论文

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1、华中科技大学硕士学位论文结论低浓度﹤2.5CSE短时间24小时内香烟烟雾作用下可引起人气道平滑肌细胞增殖超过此浓度和时间范围外香烟烟雾则抑制气道平滑肌细胞的增殖及促进其凋亡并呈CSE时间和浓度依赖性细胞凋亡的水平与Bcl-2家族抗凋亡基因Bcl-2/促凋亡基因BaxBad比例失衡Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡以及TNFR超家族中Fas基因表达增加相关并且随着CSE干预浓度和时间的增加HASMCs内ROS的含量亦随之增加其在低水平条件下可以促进NF-êB基因表达的增加在高水平条件下则抑制NF-êB基因的表达这种变化趋势与细胞的增殖和凋亡趋势

2、相符这些说明1.除了在较低浓度条件下以外CSE对HASMC的主要作用是抑制增殖和促进凋亡引起增殖/凋亡比例失衡这可能是吸烟COPD患者发病的重要作用机制2.在HASMCs中香烟烟雾对其的促凋亡作用可以通过线粒体途径和死亡受体途径进行但是线粒体途径的作用较死亡受体途径更为明显3.气道平滑肌细胞中ROS含量是与香烟烟雾的浓度和作用时间成正比增加的但是ROS对NF-êB呈双向调节作用低浓度促进其表达高浓度抑制其表达而这种与细胞增殖和凋亡相符的变化趋势说明活性氧与NF-êB在CSE致HASMCs增殖和凋亡失衡中可能起着枢纽性调节作用活性氧可能参与某些

3、信号传导通路通过调节NF-êB的表达进而影响气道平滑肌细胞的增殖和凋亡因此活性氧和NF-êB可能在COPD的发病机制中具有重要的作用并可能是气道平滑肌细胞增殖/凋亡失衡的触发机制关键词慢性阻塞性肺疾病香烟烟雾人气道平滑肌细胞凋亡,活性氧III华中科技大学硕士学位论文Theeffectsandmechanismsofcigarettesmokeextractdisturbthebalancebetweenproliferationandapoptosisonhumanairwaysmoothmusclecells.AbstractObjecti

4、ve1:Toexaminewhethercigarettesmokeextract(CSE)inducedhumanairwaysmoothmusclecells(HASMCs)deathoccursthroughapoptosisornot;2:ObservethechangesintheexpressionofBcl-2familygenes(Bcl-2,BaxandBad)inhumanairwaysmoothmusclecellstoknowifmitochondrialpathwayisinvolvedinCSE-inducedap

5、optosis;3:ObservethechangesintheexpressionofTNFRsuperfamilygenes(FasandFasL)inhumanairwaysmoothmusclecellstoknowifdeathreceptorpathwayisinvolvedinCSE-inducedapoptosis;4:Tomeasurethelevelofreactiveoxygenspecies(ROS)inhumanairwaysmoothmusclecellsundertheincubationofCSE;5:Tote

6、stifCSE-inducedairwaysmoothmusclecellapoptosiswasmediatedbyROS,whichcouldregulatetheNFêBexpression.MethodsandMaterialsHASMCswereisolatedandcultured,whichweredividedintofourdoesgroups(2.5%CSE,5%CSE,10%CSEand20%CSE)andthreetimegroups(24hours,48hoursand72hours),respectively.We

7、analysisofcellviabilityandproliferationbyMTTassayandImmunocytochemicalstaining(PCNA).TheapoptosiswasdetectedbyAcridineorange/ethidiumbromide(AO/EB)doublestainingandflowcytometry.ThelevelofROSwasdeterminedbyNBTassayandfluorescentprobeofDCFH-DA.TheexpressionofBcl-2,Bax,Bad,Fa

8、s,FasLandNF-êBmRNAwastestedbyRealtime-PCR.TheBaxandBadproteinwasdetectedusingimmun