intermedin对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡和增殖的影响

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1、温州医学院硕士学位论文Intermedin对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡和增殖的影响姓名：薛峰申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：龚永生2012-05-26温州医学院硕上学位论文Intermedin对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡和增殖的影响中文摘要目的：1．研究低氧条件下，大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡与内质网应激途径的关系。2．研究低氧条件下，新的小分子活性肽intermedin(IMD)对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。3．研究IMD对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：组织块贴壁法原代培养肺动脉平滑肌细胞，用胰蛋白酶

2、消化法传代细胞，实验用高纯度4～6代生长良好的肺动脉平滑肌细胞。实验分组：①常氧对照组：在37。C，21％02，5％C02条件下培养②低氧组：在37。C，1％02，5％C02条件下培养③IMD组：在37。C，1％02，5％C02条件下培养+IMD干预(用药浓度lO～、10～、10～mol／L)。Hoechst和Tunel染色计数凋亡细胞检测凋亡率；化学比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶含量；分光光度比色法检测caspase．3酶活性水平；Westernblot和实时定量PCR法分别检测caspase．12、GRP78、GRP94蛋白和mRNA表达水平；Brd

3、u和CCK．8法检测细胞增殖率。用SPSSl2．0软件统计分析，所有实验数据以i姆表示，p<0．05时认为差异有统计学意义。结果：1．细胞凋亡率：低氧组明显高于常氧组(p<0．01)；IMD。9组、IMD。8组均高于低氧组(p<0．05)；而IMD。7组明显高于低氧组(p<0．01)。2．caspase．3酶活性：低氧组明显高于常氧对照组(矽<0．001)；IMD’9组、IMD{组与低氧组相比无明显变化(p>O．05)；而IMD。7组高于低氧组(p<0．05)。3．GRP94、GRP78及caspase．12蛋白表达水平：低氧组明显高于常氧组(p<0．01

4、)；而低氧组与IMD母组、IMD喝组、IMD。7组之间蛋白表达没有明显的变化(p>0．05)。4．caspase．12、caspase一3、GRP78及GRP94基因表达水平：低氧组明显高于常氧组(p0．05)；而IMD。组caspase．3、GRP78、GRP94基因表达均高于低氧组(p<0．05)。5．细胞增殖率：低氧组高于常氧组(p0

5、．05)。6．LDH含量：低氧组显著高于常氧组(p<0．01)，而IMD。组和IMD培组低于低氧组(p<0．05)。结论：1、内质网应激介导的细胞凋亡途径参与了低氧性肺动脉平滑肌细胞的凋亡：外源性IMD具有促进肺动脉平滑肌细胞凋亡的作用，但内质网应激凋亡途径可能不是其促进细胞凋亡的主要途径。2、外源性IMD具有抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的作用。关键词：肺动脉平滑肌细胞；intermedin；低氧；凋亡；增殖；内质网应激温州医学院硕仁学位论文EffectsofIntermedinonApoptosisandProliferationinRatPulmonary

6、ArterySmoothMuscleCellsundertheHypoxicConditionAbstractobjective：1．Toinvestigateeffectofhypoxiaonratpulmonaryarterialsmoothmusclecells(PSMCs)apoptosisanditsendoplasmicreticulumstresspmhway．2．Toinvestigateeffectofthenewsmallmoleculeactivepeptideintermedin(IMD)ontheapoptosisofhypoxi

7、a-inducedPSMCs．3．ToinvestigateeffectoflMDontheproliferationofhypoxia-inducedPSMCs．Methods：Ratpulmonaryarterialsmoothmusclecells(PSMCs)whichwereseparatedfromratpulmonaryarterieswereculturedbytheexplant-attachedmethod．AndtheculturedPSMCswerepassagebytrypsindigestionmethod．The3tO5gen

8、erationsofgoodgrowthofPSMCswerech