dpph和frap法测定苦参中抗氧化物的活性

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1、分离纯化技术课程论文分离纯化技术课程论文学院：生命科学技术学院班级：10级生技植物班学号：2010193023姓名：李胜程5/5分离纯化技术课程论文DPPH法和ＦＲＡＰ法测定苦参体外抗氧化活性李胜程（甘肃农业大学,兰州，730070）摘要:为了测定苦参中抗氧化的活性。实验采用粉碎机研磨破碎细胞，无水乙醇、水、乙酸乙酯、甲醇作溶剂加热对药物进行提取，抗氧化能力的测定使用分光光度计，应用DPPH（二苯代苦味酰基自由基）和FRAP（铁离子还原法）进行测定。通过测定苦参提取液对DPPH自由基的清除能力和FRAP值，表征其抗氧化能力[1]。结果表明:根据DPPH法测得,苦参的4种提取物对DPP

2、H自由基的清除能力表现为: 蒸馏水<乙酸乙酯<甲醇<无水乙醇。采用铁还原/抗氧化能力（FRAP法）测得抗氧化性由大到小为:乙酸乙酯>甲醇>无水乙醇>蒸馏水。关键词：苦参;抗氧化物;DPPH;分光光度计;FRAP;苦参,（英文名LightyellowSophoraRoot）别名为野槐根、山槐根、干人参、苦骨。属豆科植物,落叶亚灌木。根黄色。苦参又叫地参,以叶似槐,所以又叫野槐,为豆科槐属植物,根部入药。秋冬二季采挖,除去根头及泥土,晒干切片备用[2]。中医学上以根入药,性寒,味苦。主治清热燥湿,杀虫利尿;用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风;外治

3、滴虫性阴道炎[3]。通过现代医学分析化验,苦参根含有多种苦参碱,如苦参碱(matrine)、氧化苦参碱(oxymatrine)、羟基苦参碱(sophoranol)、别苦参碱(allomatrine)、野靛碱(cytisine)、甲基野靛碱(methlcytisine)、臭豆碱(anagyrine)、赝靛叶碱(baptifoline),还含有黄酮类、皂甙类、氨基酸类、脂肪类、挥发油等复杂化合物,并由此产生多种药理作用[4]。1.实验部分1.1.仪器粉碎机、旋转蒸发器、紫外可见分光光度计、电子天平、水浴锅、离心机、三角瓶、量筒、25ml容量瓶、离心管、带塞三角瓶、移液枪、试管架1.2.试

4、剂5/5分离纯化技术课程论文DPPH（二苯代苦味酰基自由基）、TPTZ、ASA、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯、甲醇、苦参、FRAP工作液（10ml乙酸钠缓冲液、1mlTPTZ、1mlFeCl3现配现用）1.3.实验方法1.3.1.提取液的制备1.3.1.1.乙酸乙酯提取：打开恒温水浴锅，把温度设置成90℃，把回流系统的圆底烧瓶放在水浴锅内，冷凝管与圆底烧瓶连接，倒入定量的乙酸乙酯，接冷水（下进上出）进行回流2个小时。裁取一张滤纸制作成药包，称量5g苦参倒入药包中将药包放入回流系统中。回流后把液体平均倒入两个大的离心管中，在4000r/min下离心20min。离心完后把上清液倒入蒸发浓缩

5、系统中进行浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容止25ml。1.3.1.2.蒸馏水提取：将50ml的蒸馏水和5g的苦参加入三角瓶中，轻轻摇动，放入40℃的水浴锅加热3个小时。3个小时后平均倒入两个离心管中，接着把离心管放在4000r/min离心2min。然后放在接好的蒸发浓缩系统中进行蒸发浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容到25ml。1.3.1.3.甲醇提取：将50ml的甲醇和5g的苦参加入三角瓶中，轻轻摇动，放入40℃的水浴锅加热3个小时。3个小时后平均倒入两个离心管中，接着把离心管放在4000r/min离心2min。然后放在接好的蒸发浓缩系统中进行蒸发浓缩，待

6、快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容到25ml。1.3.1.4.无水乙醇提取：将50ml的无水乙醇和5g的苦参加入三角瓶中，轻轻摇动，放入40℃的水浴锅加热3个小时。3个小时后平均倒入两个离心管中，接着把离心管放在4000r/min离心2min。然后放在接好的蒸发浓缩系统中进行蒸发浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容到25ml。1.3.2．DPPH清除率和FRAP值的计算DPPH清除率的计算：清除率﹪=（A0-A30min）/A0×100%FRAP值的计算：FRAP=(A4min-A0)/AFeSO4×500ul1.3.3．结果与分析5/5分离纯化技术课程论文表1.苦参不

7、同物质提取物的FRAP值提取物吸光值A0甲醇的吸光值A4minFeSO4的吸光值AFeSO4FRAP值乙酸乙酯0.0570.0120.65434.40无水乙醇0.0420.0120.65422.93甲醇0.0460.0120.65425.99蒸馏水0.0360.0120.65418.34ASA0.1080.0120.65473.39表2.苦参不同物质提取物的DPPH值提取物吸光值A0甲醇的吸光值A30min清除率﹪乙酸乙酯0.1080.6320.797无水