不同溶剂对苦参体外抗氧化物的测定

《不同溶剂对苦参体外抗氧化物的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、不同溶剂对苦参体外抗氧化物的测定摘要：目的测定苦参中抗氧化物的活性。方法分别用甲醇、无水乙醇、水、乙酸乙酯作为溶剂对苦参中的活性物质进行提取，通过DPPH法和FRAP法进行测定，通过测定苦参提取液对DPPH自由基的清除能力和FRAP值，从而得到其抗氧化能力。实验结果4种溶剂苦参提取物。甲醇提取物在清除DPPH·能力方面优势明显，无水乙醇提取物在还原Fe3+能力方面表现良好，及抗氧化能力为884.62μΜ。关键词：苦参DPPHFRAP分光光度计苦参（学名：Sophoraflavescens）为豆科苦参属的植物。

2、其中含有的抗氧化物为黄酮类化合物(flavonoids)，是植物在长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物，常作为抗氧化剂、杀菌剂、感光器、外观引诱剂等，它们对植物的生长发育、开花结果以及防御异物的侵害都具有重要作用。20世纪30年代，研究人员发现黄酮类化合物具有与维生素C类似的活性，曾一度被称为维生素P［1］。研究证明，黄酮类物质是一种良好的活性氧自由基清除剂［2－3］，不同结构的黄酮对于不同类的氧自由基有不同的清除效果，而自由基损伤是一个被人们普遍接受的人体衰老理论［4］。洪新宇等［5］研究发现，竹茹黄酮

3、能够减少丙二醛(MDA)的生成、增强超氧化物歧化酶(SOD)的活性，表明竹茹黄酮具有增强细胞抗氧化能力的作用。刘燕等［6］研究表明黄酮具有明显的抗衰老作用。目前关于苦参黄酮类物质的研究主要集中在其结构确定［7］和药理活性方面［8－9］，而有关其抗氧化活性方面的研究报道较少。作者通过测定苦参提取物的还原能力及其对DPPH·的清除能力来评价其抗氧化性能。1材料、药品、耗材和方法1.1材料：苦参粉末1.2药品：甲醇、无水乙醇、水、乙酸乙酯、ASA、DPPH、FRAP、硫酸亚铁溶液1.3耗材：旋转蒸发仪、水浴锅、电子

4、天平、普通离心机、恒温水浴箱、分光光度计、三角瓶、离心管、烧杯、量筒、移液枪、试管架1.4实验方法：1.4.1样品的提取称取苦参粉末5g，将其加入备好的已加入50ml甲醇的锥形瓶中，慢慢摇动让甲醇浸没材料，接着将锥形瓶固定于40℃的水浴锅中温浴3h,然后关闭水浴锅电源，取出锥形瓶，取上清液，在4000r/min离心15min，取上清浓缩至小体积再用无水乙醇定溶至25ml,导入离心管中备用，采用相似提取方法，用水、无水乙醇、乙酸乙酯分别提取其活性成分，将提取液装入干净的离心管备用。1.4.1样品的测定DPPH法

5、参考Larrauri和Yokozawa等[6,7]的方法进行修改.利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰,以分光光度法测定加抗氧化剂或植物提取液后A515nm吸收的下降表示其对有机自由基消除能力.取三个5ml离心管分别标号1、2、3，在标号1的离心管中加入200ul的乙醇和3800ul的DPPH;在标号2的离心管中加入200ul的样品和3800ul的DPPH;在标号3的离心管中加入200ul的ASA和3800ul的DPPH，然后将三个离心管放置在暗处，室温30min后，在515nm处测定吸光度，计算自由基清除

6、率。清除率=[（A0-A）/A0]*100.A0为空白吸光度；A为试样吸光度。FRAP法参照Benzie与Strain的方法[8]。该法原理为Fe3+-三吡啶三吖嗪(tripyridyl-triazine,TPTZ,Sigma)可被样品中还原物质还原为二价铁形式,呈现出明显的蓝色,并于593nm处具有最大光吸收,根据吸光度的大小计算样品抗氧化活性的强弱。首先配制工作液，按缓冲液:TPTZ:FeCl3.6H2O=10:1:1的比例配制工作液。取五个5ml离心管分别标号1、2、3、4、5，在标号1的离心管中加入3

7、10ul的已醇;在标号2的离心管中加入10ul的FeSO4.7H2O(500um)和300ul的FRAP;在标号3的离心管中加入10ul的已醇和300ul的FRAP;在标号4的离心管中加入10ul样品和300ul的FRAP;在标号5的离心管中加入10ulASA和300ul的FRAP，然后在5个离心管中分别再加入3ml的已醇，将5个离心管分别在593nm处测其吸光度，记录数据，计算FRAP值。FRAPvalue=(AA593nmtestsample/AA593nmstandardsample)*500μΜ.A为

8、试样吸光度。）2实验结果通过实验数据可以得出DPPH法各样清除率分别为：甲醇样67.3；乙酸乙酯样46.8；无水乙醇样57.2；水51.7。以ASA对自由基的清除率为参照，由方差分析的柱状图来看，甲醇提取样和水提取样的标准误最大，乙酸乙酯和无水乙醇提取样对自由基的清除能力与ASA对自由基的清除能力相当，但二者的清除自由基能力显著高于甲醇提取样和水提取样的。由此结果可知，植物活性成分的提取方法以乙酸乙