加味左金丸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响论文

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1、加味左金丸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响论文胡运莲刘桂喜谭大琦【摘要】［目的］观察加味左金丸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原(PA，用增殖指数PI表示）和端粒酶活性（用hTERT表示）的影响。［方法］采用甲硝基亚硝基胍（MNNG）、0.03%雷尼替丁、56℃15%盐水、0.85%脱氧胆酸钠、40%乙醇、饥饱失常等多种因素制作大鼠胃癌前病变模型和免疫组化方法检测正常组、自然恢复组、加味左金丸高、中、低剂量组、维甲酸组大鼠胃黏膜组织中PA（换算成增殖指数PI）和hTERT蛋白表达情况。［结果］（1）加味左金丸高、中、低组PI与维甲

2、酸组比较差异有统计学意义（P＜0.05），这四组均与自然恢复组比较差异有统计学意义(P0.01或0.05)。（2）加味左金丸各组及维甲酸组hTERT蛋白阳性率均较自然恢复组降低，但仅中剂量组有统计学意义(P0.05)。［结论］加味左金丸通过抑制端粒酶及细胞增殖活性，发挥逆转胃癌前病变的作用。【关键词】胃肿瘤癌前病变端粒酶增殖细胞核抗原加味左金丸EffectofAdjustedZuoJinPillsonProliferatingCellNuclearAntigenandTelomeraseActivityinRatseraseactivity(

3、representedbyhumantelomerasereversetranscriptase,hTERT)inratsodeldeoxycholate,40%alcoholstimulus,0.03%ranitidine，unduehunger,overeating.PA(convertedtoPI)andhTERTmunohistochemicalmethod,innormalgroup,sponsaneousrecoverygroup,AZPgroupsofhigh?鄄dosage,medium?鄄dosage,loedium,and

4、loedium?鄄dosageAZPgroupandthesponsaneousrecoverygroup(P0.05).［Conclusion］AZPmakesGPLreversedinratesbyinhibitingactivityoftelomeraseandcellproliferating.Keys;precancerouslesions;telomerase;proliferatingcellnuclearantigen;adjustedZuoJinpills近年研究表明，端粒酶活化是细胞保持持续分裂增殖的基础，与细胞的异常增殖

5、密切相关.freell。即用型PA单抗、即用型端粒酶催化活性亚单位（hTERT）多抗、SP试剂盒、DAB即用型显色试剂盒均购自北京中山生物技术公司。显微摄像全自动图像分析仪由武汉大学医学院病理教研室提供，软件为同济千屏影像工程公司HPIAS2000型图像分析软件。1.2造模及给药方法选用SPF级6周龄SD雄性大鼠60只，体重100g~120g（武汉市疾病预防控制中心提供）。造模参照严茂祥4综合方法并加以改进。大鼠自购进后适应性喂养1周。从60只大鼠中随机抽取10只作为正常组，其余50只用于造模。正常组大鼠不做任何处理；造模大鼠每日自由饮用10

6、0μg/mlMNNG液(饮料瓶用油漆涂黑避光)、进食含0.03%雷尼替丁的纯鼠饲料、上午用56℃、15%的氯化钠液按10ml/kg灌胃，进食2d、禁食1d，进食当天下午用0.85%脱氧胆酸钠溶液按10ml/kg灌胃，禁食当天下午用40%乙醇按10ml/kg灌胃，连续24周。24周末时随机抽取正常组和造模大鼠各1只，杀检，观察组织病理学变化（以HE染色光学显微镜下观察的结果为主），确认模型是否成功。造模过程中共死亡6只。模型成功后，将造模存活的43只大鼠随机分为自然恢复组11只，维甲酸组8只，加味左金丸高、中、低剂量组（简称高、中、低剂量组）各

7、8只。高剂量组每日每只按20g/kg（相当于成人一日用量的2倍）灌胃，中剂量组按10g/kg（相当于成人一日用量）灌胃，低剂量组按5g/kg（相当于成人一日用量的一半）灌胃。维甲酸组按40mg/kg灌胃。上述治疗16周。自然恢复组同正常组大鼠常规饮食。40周末所有动物禁食1d，处死，剖腹取胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，肉眼观察，平铺于硬纸板上，于胃窦部剪取组织1块，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片5μm，免疫组织化学染色。1.3检测方法免疫组织化学用SP法，按试剂说明书操作，DAB显色，PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。免疫

8、组化染色阳性信号为棕色，PA阳性物质定位于细胞核，hTERT阳性物质定位于细胞浆。采用显微摄像计算机图像分析系统，每张切片检测5个视野（×400）。计算PA阳性细胞