敦煌平胃丸对胃癌前病变大鼠notch信号通路中notch2和jaggedl表达的影响

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1、敦煌平胃丸对胃癌前病变大鼠Notch信号通路中Notch2和Jaggedl表达的影响付航1刘喜平1，2张炜3李沛清11甘肃中医学院基础医学院，甘肃兰州730000；2甘肃中医学院敦煌医学与转化省部共建教育部重点实验室，甘肃兰州730000；3兰州大学第一医院，甘肃兰州730000【摘要】目的：观察敦煌平胃丸对胃癌前病变（PLGC）模型大鼠胃黏膜组织Notch信号通路中Notch2和Jagged1表达的影响。方法：采用复合法建立PLGC大鼠模型，将32只大鼠随机分为4组，每组8只。敦煌平胃丸组用敦煌平胃丸浸膏按每日生药96g/kg掺

2、入饲料中喂养给药，共计12周。观察大鼠胃黏膜病理组织学变化；采用）和异型增生(Dysplasia，Dys)的一种病理状态。研究显示Notch信号通路参与了胃黏膜的癌变过程［1］。敦煌平胃丸源于敦煌遗书，该方临床治疗慢性萎缩性胃炎及胃癌前病变疗效确切［2-3］。为了进一步揭示敦煌平胃丸的药效及作用机理，本研究以PLGC大鼠为模型，研究了敦煌平胃丸对胃黏膜Notch信号通路中Notch2和Jagged1表达的影响，现报道如下。1材料11实验动物采用SPF级健康NNG），购自上海国药集团化学试剂有限公司，批号M0527；Notch2及J

3、agged1抗体购自兰州维科生物工程有限公司（批号RMA0546）；胎牛血清购自兰州维科生物工程有限公司；EastepTM通用型总RNA提取试剂盒:型号LS1OO，普洛麦格上海生物产品有限公司；RNAse-ExitusPLUS（德国Applichem公司)，批号OD008558；超声波破碎仪（德国merck公司）；超微量分光光度计（K5500北京凯奥科技公司）；凝胶成像分析仪（170-8170，美国BIORAD公司）；PCR热循环仪（C1000，美国BIORAD公司）。2方法21大鼠模型建立及分组给药211PLGC大鼠模型建立.j

4、yqkl和40℃50%的酒精75ml充分搅匀配成10g/l的母液250ml(每周配1次)，于4℃冰箱保存。使用前将MNNG加入母液，稀释成浓度为100μg/ml的溶液，避光保存。各造模组大鼠自由饮用MNNG与酒精复合溶液；各造模组大鼠雷尼替丁与60℃150g/热盐水按225g/L混合后灌胃。各造模组大鼠均配合饥饱失常(2d饱食，1d禁食)。212分组及给药32只大鼠适应性喂养7d后，随机分为4组，每组8只：空白对照组，常规喂养；PLGC模型组，按照前述方法造模，常规喂养，共计12周；自然恢复组，按前述方法造模，常规喂养，共计12周

5、，第13周造模结束后，继续常规喂养12周；敦煌平胃丸组，按照前述方法造模，常规喂养，共计12周，第13周开始，按每日生药96g/kg剂量（相当于60kg成人剂量的20倍计算），将敦煌平胃丸浸膏，掺入饲料中喂养12周。22各组大鼠胃黏膜病理组织观察及积分将大鼠禁食24h后(自由饮水)，腹部注射20%乌拉坦(约10ml/kg)，剖腹取胃，沿胃大弯切开，PBS溶液漂洗2遍后，肉眼观察大鼠胃壁弹性、黏膜色泽。剪取胃窦部胃组织，将其置于10%多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋，切片，染色，光镜下观察胃黏膜厚度，腺体排列及肠化增生情况。.jyqkg

6、组织加1ml预冷的蛋白提取试剂，提取组织蛋白质。超声破碎仪粉碎组织，加入RIPA缓冲液匀浆，超微量分光光度计测蛋白质浓度；取100μl上清液，取相同质量的细胞裂解液，并加等体积的电泳加样缓冲液，沸水浴中3min，上样、电泳（浓缩胶20mA，分离胶35mA），电转膜仪转膜（100mA40min），膜用丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色，asterMix进行PCR扩增，将扩增物进行20%琼脂糖凝胶电泳。PCR引物由采用Primerpremier5及Oligo6等生物软件进行引物设计，目的基因片段长度设计为100bp，内参片段长度设计为15

7、0bp。Notch2和Jagged1基因引物见表1。采用博德公司的凝胶成像分析系统进行图像采集，并用QuantityOne42软件分析目标条带mRNA与β-actins的mRNA的积分光密度比值，计算相对量。25统计学方法用IBMSPASS190统计软件对数据结果进行处理分析，数据以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析的方法，进行方差齐性检验后，组间的比较采用LSD与SNK法检验。检验水准为005。3结果31各组大鼠胃黏膜组织病理观察及积分结果见图1、表2。正常组大鼠胃黏膜腺体排列整齐，紧密呈管状，细胞层次清晰，腺上皮及

8、基底层细胞排列规则，黏膜下平滑肌层完整，沿上皮排列，未见特异改变；PLGC模型组大鼠胃黏膜腺体可见结构紊乱、形态不规则、排列拥挤、并有复层及背靠背现象，细胞核极性消失，胞核增大、深染、异形，核呈空泡状，胞浆嗜碱，间质水肿，充血，淋巴细胞、浆细胞、中