抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原表达的影响

《抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原表达的影响作者：姜慧轶林卫红马涤辉刘仕成崔俐【摘要】目的研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原的影响。方法采用鼠脑立体定向的方法建立大鼠脑胶质瘤动物模型并进行分组：抑胶素不同浓度实验组(Ⅰ：8μg/kg;Ⅱ：16μg/kg;Ⅲ：32μg/kg;Ⅳ：64μg/kg)、对照组，于治疗14d后计算瘤体变化，应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PA)的表达，观察瘤细胞增殖变化情况。结果抑胶素Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组对C6脑胶质瘤细胞有显著抑制作用，其瘤体积及抑瘤率与对照组比较有统计学差异(P<0.05，P&

2、lt;0.01);抑胶素能够使胶质瘤PA指数下降，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组PA指数(%)与对照组相比较有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。结论抑胶素能够抑制大鼠脑胶质瘤体内生长。其机制之一可能与胶质瘤内PA表达，使肿瘤细胞增殖水平下降有关。【关键词】抑胶素;脑胶质瘤;增殖细胞核抗原神经胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，是颅内肿瘤中最常见的一种，因其侵袭性生长的特性，手术难以完全切除，复发率极高，因此，寻求一种高效低毒、特异性高、不易发生耐药的抗胶质瘤药有重要意义。抑胶素(antigliomatin)作为一种特异性氯离子通

3、道阻滞剂，是一种蝎毒素多肽。为观察其抑瘤效应及探讨其抗肿瘤的作用机制〔1〕，本研究观察了其对大鼠脑胶质瘤形态学的影响及对脑胶质瘤细胞增殖细胞核抗原的作用。　　1材料与方法　　1.1细胞株和实验动物大鼠C6脑胶质瘤细胞株是由雄性大鼠静脉注射硝甲基脲而诱发产生的恶性胶质瘤细胞株。本实验所用的瘤株由吉林大学病理毒理学教研室提供。抑胶素由吉林大学基础医学院生理教研室提供。动物选用雄性、健康DM培养液中,置于含5%CO2、37℃恒温密闭式孵箱中培养，每周传代2次。当细胞增殖进入对数阶段，培养瓶细胞长满时，先倒去培养液，用0.25%胰酶溶

4、于不含Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液中消化细胞，在显微镜下观察到细胞开始皱缩时加入营养液中和，反复吹打，使之脱壁，1000r/min离心5min，弃上清，制成细胞悬液。体外培养的C6胶质瘤细胞爬片常规应用免疫组化(SABC法)检测GFAP蛋白的表达，阳性细胞胞浆呈现棕黄色着染。　　1.3接种方法收集对数生长期生长状态良好的C6细胞，细胞浓度为2.0×106/10μl，经MTT法检测细胞存活率达90%以上。以2.0×106个细胞/只鼠的量接种，所有的大鼠均采用立体定向方法进行接种。根据Barker法确定切口和钻孔位置，在大鼠脑

5、立体定位仪上选取大鼠脑右侧尾状核区为靶点，从头部正中矢状面交点向后纵向切开皮肤，暴露颅骨标志，按前述坐标点定位，用牙科钻在颅骨上钻孔，孔径1.2mm，用10μl的微量注射器针头锐性刺破硬膜在立体定向引导下接种针垂直缓慢延伸至硬膜下6.0mm，再后延1.0mm于硬膜下5.0mm靶点处，将10μl细胞悬液以1μl/min缓慢注入靶区，留针5min，使细胞充分沉积，缝合头皮。每只大白鼠每天给予青霉素10万U腹腔注射共5d以预防感染。　　1.4动物分组荷瘤7d后将全部in,微波修复抗原10min。10%正常山羊血清封闭非特异性抗原室温

6、下60min。倾去血清，加1∶100稀释的PA，置湿盒内4℃过夜。PBS冲洗5min×3次，滴加生物素化二抗工作液，加盖湿盒内室温下60min。PBS振洗5min×3次。加入SABC复合物，室温下60min，PBS振洗5min×4次。DAB显色液显色。苏木素衬染3min。自来水冲洗，酒精水化，二甲苯透明，中性树胶封片。正常脑组织为正常对照，结果以胞核或(和)胞质中出现棕黄色颗粒为阳性，高倍视野下(400倍)阳性细胞数所占总肿瘤细胞的百分率即为PA标记指数(LI)。　　1.7统计学分析采用SPSS统计分析软件，计量资料采用x±s

7、表示，并计算抑瘤率，然后进行t检验。　　2结果　　2.1实验大鼠的肿瘤体积和抑瘤率的变化活体灌注4%多聚甲醛固定肿瘤标本，沿脑表接种穿刺点做冠状切口，测量肿瘤大小，计算出各实验组的抑制率，并与对照组做比较，用完全随机设计两总体均数比较的t检验对所测得的肿瘤体积大小进行统计学处理、分析。由表1可以看出：实验组Ⅰ肿瘤体积与对照组相比无统计学意义(t=0.86，P>0.05);实验组Ⅱ～Ⅳ与对照组相比有显著差异(P<0.05，P<0.01)，并且随抑胶素浓度增大，瘤体积缩小越明显，抑瘤率也随抑胶素浓度增高而增加，实

8、验组Ⅰ组与Ⅱ组比较无统计学差异(P>0.05)，其余各组两两比较有显著性差异(P<0.05)。见表1。　　2.2PA免疫组化结果分析PA阳性细胞的胞核呈黄色或棕黄色，镜下计数肿瘤内5个视野的阳性细胞。对照组肿瘤细胞中PA蛋白阳性表达率平均为72.18%，表现为阳性