放射治疗对人宫颈癌组织的增殖细胞核抗原表达的影响

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1、放射治疗对人宫颈癌组织的增殖细胞核抗原表达的影响　　摘要:目的探讨放射前、后人宫颈癌组织增殖细胞核抗原（PA）表达的变化.方法在多聚甲醛固定的活检癌组织冰冻切片上，进行PA的免疫组织化学染色.结果放疗前的宫颈癌组织内，多数癌细胞呈PA免疫染色阳性;照射（30～40Gy）后，多数癌细胞无PA染色，但间质细胞的PA免疫染色明显升高，大量间质细胞则呈中等或强阳性染色.结论放射抑制宫颈癌细胞的PA表达的同时，诱导间质细胞的PA表达.提示PA的表达状态可作为放射治疗中评价宫颈癌细胞增殖和间质组织修复的分子指标之一.　　Keyancervicalcancer.METHODSImm

2、unohis-tochemicalstainingforPAedinfreezingsec-tionsofformalin-fixedcervicalcancerbiopsytissue.RE┐SULTSMajorityofcancercellsshomunoreac-tivitybeforeirradiation.Follomunopositivestainingostofcancercells.PA-immunoreactivity，hooderateorheavyimmunopositivestainingforPAesenchymaltissuecells.C

3、ONCLUSIONIrradiationinhibitsPAexpressionincervicalcancercellsesenchymaltissuecells.Thepresentresultssug-gestthatexpressionofPAmayberegardedasamolecularmarkerforevaluatingthecancercellproliferationandmes-enchymaltissuerepairduringradiotherapyofhumancervicalcancer.　　0引言　　宫颈癌是人类发病率很高的恶性肿瘤，

4、放射治疗对它具有明确有效的治疗效果，放疗后的远期生存率较高.因此，探讨宫颈癌的放射生物学机理，对于提高肿瘤的整体放射水平可能具有重要的意义.增殖细胞核抗原（PA）是一种高度保守的蛋白分子，具有参与DNA复制和DNA修复的功能，PA的表达情况是反映细胞增殖状态的重要指标［1-3］，研究资料表明PA在宫颈癌组织中有表达［4-6］，但PA在宫颈癌放射治疗中的意义，有待于进一步阐明.因此我们利用免疫组织化学等方法，对放射治疗中宫颈癌组织PA的变化及其意义进行了探讨.　　1材料和方法　　1.1临床资料与活检材料宫颈癌活检组织标本18例，取自临床病理诊断为鳞状细胞癌患者，病理分级

5、为Ⅰ-Ⅱ.患者年龄为36～56岁.其中，放疗前标本8例，放疗后标本10例.接受放射治疗的患者分别接受盆腔照射30～40Gy/15～20次.宫颈癌活检组织标本，入40g・L-1多聚甲醛0.1mol・L-1的磷酸缓冲液（pH7.4），4℃下固定24～48h.然后换入30g・L-1蔗糖溶液内，4℃下过夜.冰冻连续冠状切片，切片厚10μm，每例取30张切片，按顺序分为3套，置于-20℃保存备用.染色前将切片晾干，然后分别作常规HE染色、PA免疫组化染色和对照染色.　　1.2免疫组织化学染色（ABC法）切片于10mmol・

6、L-1磷酸缓冲盐水（PBS，pH7.4）内洗10min，再入含0.3ml・L-1过氧化氢溶液内处理30min，用以灭活内源性过氧化物酶.经PBS洗后，入鼠抗PA单克隆抗体（浓缩型第一抗体，从博士德公司购买，用含2ml・L-1正常山羊血清和0.1ml・L-1TritonX-100的PBS稀释，1∶100）内，于4℃下孵育48h.然后入biotin标记的兔抗鼠IgG（1∶200，Vector公司）溶液内，室温下放置4h.入ABC复合物（1∶200，Vector公司产品）溶液，室温下孵育2h.每次抗体孵育后均用PBS洗，3×10mi

7、n.最后入DAB/H2O2溶液（0.05g・L-1/0.01g・L-1）反应10min.另外，用正常小鼠血清溶液代替特异性第一抗体孵育切片，作为免疫染色对照.　　1.3半定量分析参照以往文献中的定量方法［4，6，7］，对PA免疫染色阳性细胞的半定量分析，在放疗前（n=8）和放疗后（n=10）活检组织10μm切片（10张/例）上，随机选取一高倍视野，计数单位面积（6.25mm2）PA免疫阳性细胞数目.　　1.4统计学检验比较放疗前与放疗后两组的PC-NA免疫阳性胞体细胞数目（x±sx），进行单因素χ2检验.　　2结果　　2.