维a酸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响

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1、维A酸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响作者：杨赤兵，谭大琦，李卫星，姜楠【摘要】目的观察维A酸（RA）对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原（PA，用增殖指数PI表示）和端粒酶活性（用hTERT表示）的影响。方法采用甲硝基亚硝基胍（MNNG）、0.03%雷尼替丁、56℃15%盐水、0.85%脱氧胆酸钠、40%乙醇、饥饱失常等多种因素制作大鼠胃癌前病变模型,免疫组化方法检测正常组、自然恢复组、RA20mg/kg和RA40mg/kg组大鼠胃黏膜组织中PI和hTERT蛋白表达情况。结果正常组和RA40mg/kg组PI、hTER

2、T蛋白阳性率均较自然恢复组低，差异有显著性（P<0.01或P<0.05）。结论维A酸可能是通过抑制端粒酶及细胞增殖活性，发挥逆转胃癌前病变的作用。【关键词】维A酸；癌前病变；增殖细胞核抗原；端粒酶　　Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofretinoicacid（RA）onproliferatingcellnuclearantigen(PA,representederaseactivity(representedantelomerasereversetranscriptase，h

3、TERT)inratsodeldeoxycholate，40%alcoholstimulus，0.03%ranitidine，unduehunger，andovereating．PA(convertedtoPI)andhTERTmunohistochemicalmethod，innormalgroup，spontaneousrecoverygroup，andRA（20mg/kgand40mg/kg）group．ResultsPIandhTERTofnormalgroupandRA40mg/kggroupsakesGPLrever

4、sedinratesbyinhibitingactivityoftelomeraseandcellproliferating．　　Keyerase　　利用某些化学物质诱导肿瘤细胞分化为正常细胞或近似正常细胞，已成为抗肿瘤药物研究的热点，维A酸是肿瘤分化诱导剂的代表之一。维A酸对多种化学致癌过程和诱癌作用有抑制作用，具有逆转胃癌前病变大鼠的肠化生和不典型增生作用，对急性早幼白血病M型的疗效,已被证实和公认［1，2］。为进一步探讨其作用机理，本文观察维A酸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响，报告如下。　　1材料　　1.

5、1实验动物SPF级,雄性NNG）为Fluka公司产品；脱氧胆酸钠，北京双旋微生物培养基制品厂；雷尼替丁，杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司；无水乙醇，上海振新兴化工一厂；氯化钠，天津化学试剂三厂；即用型PA单抗、即用型端粒酶催化活性亚单位（hTERT）多抗试剂盒、SPDAB即用型显色试剂盒均购自北京中山生物技术公司。　　1.3主要仪器CUT5062轮转切片机，德国SLEE公司；BX40系统显微镜，日本OLYMPUS公司；HPIAS1000型显微摄像全自动图像分析仪，同济千屏影像工程公司。　　2方法　　2.1造模及给药方法按综合法

6、复制模型［3］。大鼠50只，随机抽取11只作为正常对照组，其余39只用于造模。正常对照组大鼠不做任何处理；造模大鼠每日自由饮用100μg/mLMNNG液（新鲜配制，饮水瓶用油漆涂黑避光），上午用56℃、ρ=15%的氯化钠液10mL/kg灌胃。摄食为含ρ=0.03%雷尼替丁的纯鼠饲料,饥饱相间，进食2d的当天下午，用ρ=0.85%脱氧胆酸钠溶液按10mL/kg灌胃；禁食1d的当天下午，用φ=40％乙醇10mL/kg灌胃，持续6个月(造模过程中死亡6只大鼠)。6个月末时,取正常和造模大鼠各1只杀检,观察组织病理学变化，确认模型是否成

7、功。模型成功后，将造模存活的大鼠,随机分为:自然恢复组12只、RA20mg/kg和RA40mg/kg组各10只。　　　　正常对照组和自然恢复组大鼠给蒸馏水10mL/kg；RA20mg/kg和RA40mg/kg组大鼠分别给0.2%RA和0.4%RA10mL/kg灌胃,每日1次，连续3个月(自然恢复组大鼠死亡4只)。末次给药后,所有动物禁食1d，放血处死，剖腹取胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，肉眼观察，平铺于硬纸板上，于胃窦部剪取组织1块，Φ=4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片5μｍ,免疫组织化学染色。　　2.2检测方法免疫组织化学用

8、SP法，按试剂说明书操作，DAB显色，PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。免疫组化染色阳性信号为棕色，PA阳性物质定位于细胞核，hTERT阳性物质定位于细胞质。采用显微摄像计算机图像分析系统，每张切片检测5个视野（×400）。计算PA阳性细胞数以及