非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及gvhd影响的实验研究论文

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1、非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究论文.freelg/kg，并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示，致敏后DLI的受鼠（黑色）无1例出现GVHD，60天时转变为完全供者嵌合，表型明显呈现为供鼠（白色）特征，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降，半月后有所升高，但仍低于正常水平；未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD，嵌合率稍有上升，仍表现为混合嵌合体（MC），CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高，后期降至正常水平。结论：经受者皮

2、肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率，CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。【关键词】非清髓性异基因造血干细胞移植EffectsofSensitizedDonorLymphocyteInfusionontheChimerismandGraft-versus-HostDiseaseafterNonmyeloablativeAllogeneicStemCellTransplantationAbstractToexploreerismcouldbeachievedandgraft-versus-

3、hostdiseasecouldbealleviatedbydonorlymphocyteinfusionaleC57BL/6mice(H-2b，B6)asrecipientsreceivedtotalbodyirradiation(TBI)of5.5Gy(60Coγ-ray)onday0folloatopoieticstemcelltransplantation(allo-HSCT).Theallo-graftsconsistedof2×107peripheralhematopoieticstemcellsfrommob

4、ilizedmaleBALB/c(H-2d)donormiceulatingfactor(G-CSF).Day2afterallo-HSCT，therecipientmiceg/kgcyclophosphamideintraperitoneally.Aftericephocytesatthe28daysaftertransplantation.Theresultsshoicereceivingsensitized-donorlymphocyteinfusiondidnotsufferfromGVHDandthephenot

5、ypiccharacteroftherecipientmice(blackcolor)convertedtothatofthedonormice(erism.Itphocytesofthemdecreasedattheearlierperiodandincreasedafterhalfmonth，butalvalue.NC2×107个，移植后第2天予CTX200mg/kg腹腔注射。供鼠淋巴细胞制备移植后第1天起取B6小鼠背部皮肤1cm×1cm，埋入供鼠皮内，切口局部缝合。每周1次×4周，以致敏供鼠。第28天致敏与未致敏的供

6、鼠分别经内龇静脉采血后以Ficoll分离淋巴细胞（分离方法同干细胞采集），用0.01mmol/L的PBS液重悬细胞并调节细胞浓度至8×106/ml。操作均在无菌条件下进行。实验分组设计移植后每3天采血计数白细胞、称量体重，同时观察小鼠状态，排除死亡小鼠，待第21天造血恢复，体重稳步回升后将22只受鼠随机分为3组。A组：单纯移植组（n=6）；B组：第28天回输2×106个未致敏供鼠淋巴细胞（n=8）；C组：第28天回输2×106个致敏后供鼠淋巴细胞（n=8）。同时设预处理对照组，观察造血恢复及表型变化。所有受鼠均未给予GVH

7、D防止措施。GVHD主要观察指标移植后每日观察小鼠体重、体形、体位、毛发、腹泻等，记录存活期，存活时间超过60天者为长期存活。每3天称量体重。死亡小鼠取肝脏、脾脏、小肠和爪垫皮肤组织大体形态观察后置于10%福尔马林液中固定保存，集中包埋、切片，HE染色后光学显微镜下观察，判断GVHD情况。异基因嵌合体的测定于移植后第21、60、90天分别经内眦静脉取各组小鼠外周血250μl，EDTA抗凝后，应用GenomicDNAPurification试剂盒提取DNA，保存于-20℃。PCR扩增：输入雌性B6小鼠体内的雄性BALB/c小

8、鼠造血干细胞带有Y染色体特有的性别决定基因(SRY基因)。SRY引物用DNAStar软件设计，由上海生工生物工程公司合成，上游引物序列为5′TGGTGTGGTCCCGTGGTGAGAG3′，下游引物序列为5′GATGGCATGTGGGTTCCTGTCC3′，扩增产物为296bp，以BALB/C的DNA扩