供者型cik 细胞输注对清除异基因造血干细胞移植后微小残留病灶的功效

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1、供者型CIK细胞输注对清除异基因造血干细胞移植后微小残留病灶的功效　　异基因造血干细胞移植(allogeneicstemcelltransplantation，allo-HSCT)是可治愈血液系统恶性肿瘤的手段。然而，复发仍是导致移植失败的主要原因。且复发难治病例疗效差，病死率高，仍是临床面临的难题。移植后密切监测微小残留病灶(minimalresidualdiseases，MRD)可早期发现疾病复发，通过减停免疫抑制剂或供者淋巴细胞输注等处理，常可使患者再次达分子生物学缓解。但是，治疗后反应率低及急性移植物抗宿主病(acutegraft-versus-hostdisea

2、se，aGVHD)是导致治疗失败的主要原因。细胞因子诱导的杀伤(cytokineinducedkiller，CIK)细胞是一组以CD3+CD56+T细胞为主要效应细胞的异质细胞群，可通过非特异性免疫杀伤作用清除肿瘤患者体内微小残留病灶。传统的DLI效果并不理想，allo-HSCT后联合供者型CIK细胞治疗复发难治血液肿瘤国内外已有报道。本研究就10例在allo-HSCT后出现分子生物学复发(7例)以及形态学复发(3例)后经减停免疫抑制剂、化疗、供者淋巴细胞输注等治疗后形态学缓解，但MRD仍阳性的患者，输注供者型CIK细胞，并对其进行安全性及有效性的研究。　　1资料与方法　

3、　1.1病例资料　　收集我科2012年11月至2015年11月共10例患者，其中男性9例，女性1例，中位年龄24.5(10～41)岁。急性淋巴细胞白血病5例，急性髓系白血病4例，慢性粒单细胞白血病1例。移植前复发或未达完全缓解(pleteremission，CR)6例，CR4例(其中2例CR1、2例CR2)。　　1.2移植方式　　9例均为清髓性骨髓+外周血allo-HSCT，1例为清髓性非血缘脐血移植。单倍体移植6例，同胞全相合移植2例，同胞7/10相合1例，非血缘脐血全相合1例。急性淋巴细胞白血病患者预处理方案为TBI/Cy:TBI+CTX+ATG，急性髓系白血病及慢性

4、粒单细胞白血病患者预处理方案为改良的Bu/Cy:Bu+CTX+Ara-C+ATG。　　1.3移植后复发及治疗　　移植后每月行骨髓形态、活检，并通过流式细胞仪或PCR监测MRD。分子生物学复发经减停免疫抑制剂或供者淋巴细胞回输(donorlymphocytesinfusion，DLI)治疗，骨髓形态学复发患者行减停免疫抑制剂、化疗、化疗+DLI治疗，治疗后评估疗效，形态学缓解但仍MRD阳性患者行CIK治疗。　　1.4CIK细胞采集、扩增及检测　　采集供者外周血单个核细胞悬液80～120mL，脐带血移植患者采集的是移植后患者的外周血(完全植入，供者型)。分离并洗涤后，调整细胞

5、密度至1106/L，转移至培养瓶中，加入适量RPMI1640培养液、自体血浆和细胞因子IL-2、IFN-γ、OKT3成为细胞悬液，在37℃、5%CO2条件下悬浮培养，于培养第4、7、10、13天分别调整细胞密度，补充IL-2，同时进行细胞表型分析。培养结束后，流式细胞仪通过检测细胞的表面标志物鉴定CIK细胞的表型;并于细胞回输前计数CIK细胞;同时进行细菌、真菌学检测。　　1.5CIK细胞回输　　CIK细胞自培养基收集后制成细胞悬液，6h内回输，输注时间30min左右。回输时行CIK细胞表型鉴定、细胞活力检测及细胞计数。于培养第10～14天通过静脉途径回输。　

6、　1.6不良反应及疗效观察　　所有患者治疗前常规检查血常规、肝肾功能及心电图，治疗过程中严密监测患者心率、血压及血氧饱和度监测，发热时给予物理降温。治疗每个月随访血常规、肝肾功及微小残留病灶和骨髓形态、活检。　　2结果　　2.1移植后复发及治疗　　10例患者大部分原发病为复发难治性，移植后均达血液学和分子生物学缓解，规律监测MRD。7例出现分子生物学复发，经DLI或减停免疫抑制剂治疗后MRD仍为阳性。3例患者形态学复发，其中1例因复发时仍有明显胃肠道GVHD，减停免疫抑制剂后原始粒细胞自10.5%下降至4%，达形态学缓解，未进一步化疗及DLI等治疗;另2例分别给予化疗、化

7、疗+DLI后达完全缓解，但3例患者MRD阳性。CIK细胞治疗前所有患者均为形态学完全缓解，但MRD阳性。　　2.2细胞表型检测和细胞计数CIK　　输注前的CIK细胞经过流式细胞仪检测，其表面标志物分别为(90.4±7.0)%CD3+、(71.2±6.6)%CD3+CD8+、(18.1±5.8)%CD3+CD56+、(72.3±7.2)%CD3+CD56-、(5.5±4.4)%CD3-CD56+(10位供者的均值)。10例患者输注2～8次不等供者CIK细胞，平