非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及gvhd影响的实验研究

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1、非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究作者：陈宝安，张琰，丁家华，毕延智，赵刚，高冲，孙耘玉，孙雪梅，王骏，陈宁娜，程坚【摘要】本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注（DLI）是否能在促进形成完全供者嵌合（CC）的同时减轻移植物抗宿主病（GVHD）。以C57BL/6小鼠（H-2b，B6）为受者，于第0天接受60Coγ线全身照射（TBI），总剂量为5.5Gy，照射当天移植经粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员后的BALB/c小鼠（H-2d，BA）外周血干细胞（2×107个），移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg，并分别于移

2、植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示，致敏后DLI的受鼠（黑色）无1例出现GVHD，60天时转变为完全供者嵌合，表型明显呈现为供鼠（白色）特征，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降，半月后有所升高，但仍低于正常水平；未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD，嵌合率稍有上升，仍表现为混合嵌合体（MC），CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高，后期降至正常水平。结论：经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率，CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。【关键词】非清髓性异基因造血干细胞移植　　EffectsofSe

3、nsitizedDonorLymphocyteInfusionontheChimerismandGraft-versus-HostDiseaseafterNonmyeloablativeAllogenEicStemCellTransplantation　AbstractToexploreerismcouldbeachievedandgraft-versus-hostdiseasecouldbealleviatedbydonorlymphocyteinfusionaleC57BL/6mice(H-2b，B6)asrecipientsrecEIvedtotalbodyirradiatio

4、n(TBI)of5.5Gy(60Coγ-ray)onday0folloatopoieticstemcelltransplantation(allo-HSCT).Theallo-graftsconsistedof2×107peripheralhematopoieticstemcellsfrommobilizedmaleBALB/c(H-2d)donormiceulatingfactor(G-CSF).Day2afterallo-HSCT，therecipientmiceg/kgcyclophosphamideintraperitoneally.Aftericephocytesatthe

5、28daysaftertransplantation.Theresultsshoicereceivingsensitized-donorlymphocyteinfusiondidnotsufferfromGVHDandthephenotypiccharacteroftherecipientmice(blackcolor)convertedtothatofthedonormice(erism.Itphocytesofthemdecreasedattheearlierperiodandincreasedafterhalfmonth，butalvalue.NC2×107个，移植后第2天予C

6、TX200mg/kg腹腔注射。　　供鼠淋巴细胞制备　　移植后第1天起取B6小鼠背部皮肤1cm×1cm，埋入供鼠皮内，切口局部缝合。每周1次×4周，以致敏供鼠。第28天致敏与未致敏的供鼠分别经内龇静脉采血后以Ficoll分离淋巴细胞（分离方法同干细胞采集），用0.01mmol/L的PBS液重悬细胞并调节细胞浓度至8×106/ml。操作均在无菌条件下进行。　　实验分组设计　　移植后每3天采血计数白细胞、称量体重，同时观察小鼠状态，排除死亡小鼠，待第21天造血恢复，体重稳步回升后将22只受鼠随机分为3组。A组：单纯移植组（n=6）；B组：第28天回输2×106个未致敏供鼠淋巴细胞（n=8）

7、；C组：第28天回输2×106个致敏后供鼠淋巴细胞（n=8）。同时设预处理对照组，观察造血恢复及表型变化。所有受鼠均未给予GVHD防止措施。　　GVHD主要观察指标　　移植后每日观察小鼠体重、体形、体位、毛发、腹泻等，记录存活期，存活时间超过60天者为长期存活。每3天称量体重。死亡小鼠取肝脏、脾脏、小肠和爪垫皮肤组织大体形态观察后置于10%福尔马林液中固定保存，集中包埋、切片，HE染色后光学显微镜下观察，判断GVHD情况。　　异基因嵌合体的测定　　于移植后