携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒构建及其sknsh细胞表达的论文

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1、携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒构建及其SKNSH细胞表达的论文携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒构建及其sknsh细胞表达【关键词】α突触核蛋白;质粒;帕金森病【摘要】目的构建携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒，检测其在人神经母细胞瘤sknsh细胞中的表达及对细胞存活率的影响。方法pcr扩增alpha突触核蛋白基因，产物纯化后与pcdna3.1(+)载体进行连接反应,构建pcdna3.1(+)/alpha突触核蛋白真核重组质粒。lipofectamine法转染人神经母细胞瘤sknsh细胞，rtpcr方法检测sknsh细胞中a

2、lpha突触核蛋白mrna的表达，四甲基偶氮唑盐(mtt)法检测其对细胞存活率的影响。结果酶切鉴定及基因测序证明人alpha突触核蛋白基因已被完整、正确地插入到pcdna3.1(+)载体中。rtpcr结果显示该表达载体转染sknsh细胞后，细胞内alpha突触核蛋白mrna的表达水平明显增高，mtt方法检测结果显示该表达载体转染并未引起细胞存活率的改变。结论alpha突触核蛋白真核重组质粒构建成功,并可在sknsh细胞内表达，且对细胞的存活率不产生任何影响，从而为进一步研究alpha突触核蛋白在帕金森病发病机制中的作用奠定了基础。【关键词】α突触核蛋白

3、;质粒;帕金森病constructionoftheeukaryoticexpressionplasmidofhumanalphasynucleingeneanditsexpressioninsknshcellsheqing,dutingting,songning,etal(departmentofphysiology,shandongprovincialkeylaboratoryofpathogenesisandpreventionofneurologicaldisordersandstatekeydisciplines:physiology,qingdaouni

4、versitymedicalcollege,qingdao266071,china);[abstract]objectivetoconstructtheeukaryoticexpressionplasmidofhumanalphasynucleingeneanddetectitsexpressioninhumansknshneuroblastomacellsanditseffectoncellviability.methodspcredtoamplifytheentirefragmentofhumanalphasynucleingene,andtheamplifi

5、edgenetheneemediatedgenetransfectionmethodansknshcells.rtpcrttassayanalphasynucleingeneedigestionandsequencingmethods.levelsofalphasynucleinmrnaidtransfection.hoidofhumanalphasynucleingeneissuccessfullyconstructedandexpressedinsknshcells.thecellviabilityisnotaffected.alltheseresu

6、ltsestablishafoundationforafurtherstudyoftheroleofalphasynucleininthepathogenesyofparkinsondisease.　　[keyids;parkinsondisease　　帕金森病(pd)是最常见的神经退行性疾病，发病率仅次于老年痴呆。.其主要的病理改变是黑质致密带多巴胺能神经元脱失及伴发的纹状体轴突末梢多巴胺的耗竭[1]。pd的发病机制目前还不清楚，可能与老龄、环境毒素、遗传因素、氧化应激、兴奋性毒素、神经营养因子缺失等因素有关[23]。近年来，蛋白质的异常修饰和错误折叠在神经系统退行

7、性疾病发病中的作用越来越受到关注，被认为可能是神经细胞变性死亡的关键环节。alpha突触核蛋白为一种在健康人的脑组织中广泛分布的可溶性蛋白，被认为是pd发病机制中最重要的蛋白。alpha突触核蛋白是路易小体的主要结构成分，其聚集与路易小体的形成及多巴胺能神经元的死亡密切相关[4]。但是目前alpha突触核蛋白为何发生聚集形成路易小体以及聚集过程中对多巴胺能神经细胞的毒性作用还不十分清楚。因此，本实验拟构建一种携带人alpha突触核蛋白的真核重组质粒，并转染人神经母细胞瘤sknsh细胞，为探讨影响alpha突触核蛋