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《加味四逆散对血吸虫病小鼠肝纤维化相关因子表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、加味四逆散对血吸虫病小鼠肝纤维化相关因子表达的影响论文.freelRNA表达的影响。方法NIH小鼠经皮肤人工感染血吸虫尾蚴后随机分为4组：模型组(B组)、吡喹酮组(C组)、吡喹酮+加味四逆散组(D组)、吡喹酮+秋水仙碱组(E组),同时设正常对照组(A组)。病理观察小鼠肝组织,于肝纤维化形成后第21日开始灌服相应药物及生理盐水,C、D、E组在第45日时予以吡喹酮一次性灌胃进行杀虫,第78日小鼠心脏采血用放免法测定血清PCⅢ和HA含量,取肝组织匀浆测定Hyp含量;RT-PCR检测TGF-β1mRNA的表达。结果HA水平D组高于A组,低于B、C、E组(P0.01,P0.05
2、);PCⅢ水平D组低于B、C、E组(P0.05);Hyp水平D组高于A组,低于B、C、E组(P0.05);TGF-β1mRNA表达D组低于B、C、E组(P0.05)。结论加味四逆散联合吡喹酮能有效改善血吸虫病小鼠肝纤维化,降低TGF-β1mRNA的表达。【关键词】血吸虫病;肝纤维化;加味四逆散;透明质酸;血清Ⅲ型前胶原;羟脯氨酸;转化生长因子-β1;小鼠Abstract：ObjectivesToevaluatetheeffectofModifiedSiniPoinggrourinemodelofliverfibrosisinducedbySchistosomajapo
3、nicuminfection.MethodsTheNIHmiceajaponicumandthenrandomlydividedintomodelgroup(groupB),praziquantelgroup(groupC),.freeliceingroupsC,DandEice(groupA)servedasnormalcontrol.HistologicalspecimensRNAinedbyRT-PCRandthecontentofHypinlivereasuredbyELISA.Radioimmunoassaytechniqueployedtodetectth
4、eserumcontentchangesofHAandPCⅢ.ResultsThelevelsofHA,PCⅢ,HypandTGF-β1mRNAingroupDarkedlyloploveliverfibrosisduetoSchistosomajaponicum,perhapsbydoRNA.Keyiasis;liverfibrosis;ModifiedSiniPoice血吸虫病最主要的病理改变是虫卵肉芽肿和肝纤维化,肝纤维化是肉芽肿的间接延伸,是影响患者生活质量与导致死亡的主要原因。前期我们临床采用加味四逆散治疗慢性血吸虫病肝硬化取得了一定疗效。为探讨其治疗机理,
5、我们以加味四逆散对血吸虫病小鼠肝纤维化形成过程进行干预,观察其对血吸虫病肝纤维化小鼠透明质酸(HA)、血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、羟脯氨酸(Hyp)及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。现将结果报道如下。1实验材料1.1动物NIH小白鼠,雌雄各半,体重(20±2)g,鼠龄6～8周,湖南中医药大学实验动物中心提供,合格证号：SCXK(湘)2009-0004。1.2药物与试剂加味四逆散浓缩水煎剂：枳实、柴胡、白芍、甘草、丹参各10g,上述药物一次性从湖南中医药大学附属第一医院药房购入。2次水煎浓缩,药物浓度为100%(原药材含量1g/mL)。秋水仙碱水溶液
6、：秋水仙碱,0.5mg/片,购自中国医药集团上海化学试剂公司,批号060515,用时以生理盐水配成水溶液(0.013mg/mL)。吡喹酮溶液：吡喹酮片,200mg/片,皖卫药准字1996第100260号,淮南市第三制药厂生产,批号0311201,用1%羧甲基纤维素钠溶液配成20mg/mL的悬液(湖南省血吸虫病防治研究所何永康教授赠送)。1.3钉螺阳性钉螺共60只,湖南省寄生虫病防治研究所何永康教授赠送。2实验方法2.1孵育血吸虫尾蚴将阳性钉螺置于25℃环境下饲养10d后放入平皿内,用25℃脱氯水清洗3次,取活钉螺56只,放入50mL烧杯内,用尼龙纱罩住加满脱氯水,置2
7、8℃环境,用50MLV,Oligo(dT)18,Tac酶,MixdNTP(Promega公司);RNA酶抑制剂(大连宝生物工程有限公司);TGF-β1基因引物由上海生物工程制品公司合成;TGF-β1基因引物序列为：上游5’-TGAGTGGCTGTCTTTTGACG-3’,下游5’-ACTTCCAACCCAGGTCCTTC-3’,扩增产物350bp。β-actin：上游5’-TGACTCAAGATTGTCAGCAA-3’下游5’-AGATCCACAACGGATACATT-3’,扩增产物450bp。扩增产物经2%琼脂糖凝胶,25mV、50mA下电泳。电泳
