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时间:2018-07-07
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1、高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素的论文高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素【摘要】 建立了高效液相色谱同时测定鸭梨种子中3种内源激素赤霉素(ga3)、生长素(iaa)和脱落酸(aba)含量的方法。采用c18反相色谱柱,柱温35℃,以甲醇水(含1%乙酸)(4∶6,v/v)为流动相,流速为1ml/min,检测器波长开始用254nm,2.5min时将波长切换至210nm,至3.8min,ga3出峰结束后,再次将波长切换回254nm测定iaa和aba。ga3、iaa和aba的平均回收率分别为92.8%、91.6%和94.7%。为快速、准确分离和
2、测定鸭梨种子内源激素提供了一种可靠方法。【关键词】高效液相色谱;内源激素;鸭梨;种子 simultaneousdeterminationofthreekindsofendogenous hormonescontentinseedsofpostharvestyalipearby highperformanceliquidchromatography yanshijie,guolientoftianjinagriculturaluniversity,tianjin300384) 2(collegeoffoodscienceandengineering,
3、shanxiagriculturaluniversity,taigu030801) 3(collegeofforestresourcesandenvironment,nanjingforestryuniversity,nanjing210037) abstractahighperformanceliquidchromatographic(hplc)methodforthesimultaneousdeterminationofthreekindsofendogenoushormonegibberellin(ga3),auxin(iaa)andabscisic
4、acid(aba)contentinseedsofpostharvestyalipearatographicseparationnusingmethanol∶obilephaseatacolumntemperatureof35℃.theflol/min.uvdetectionat210nm2.5minto3.8min,ainingseparations.averagerecoveriesethodforrapid,accurateseparationanddeterminationendogenoushormoneinyalipearseeds. keya
5、nceliquidchromatography;endogenoushormones;yalipear;seed 1引言 果实的生长成熟是一个复杂的生理生化过程,植物激素与果实的发育及成熟程度有关,而种子又是激素合成的主要场所[1],因此,掌握内源激素在种子中的变化规律,对研究水果在采摘后的生理、成熟、衰老及褐变过程具有重要意义[2]。. 植物激素在植物体内含量甚微,而且其在植物体内的组成复杂,相互共存的干扰组分多,对温度等条件敏感,因而对植物激素的测定比较困难[3]。高效液相色谱(hplc)是较理想的植物内源激素分析方法,植物激素的hplc测定已在仁用
6、杏花芽[4]、甜樱桃[5]、梨[6]等果实,油菜[7]、莴苣[8]等籽粒上有所应用,对植物种子方面,主要集中在银杏[9]、山楂[10]、甜樱桃[5]、五味子[11]、早蜜梨和黄金梨[6]等种子的激素含量测定上,而对鸭梨种子中激素的分离、测定还未见。由于在联合测定植物组织抽提液中的多种内源激素时,经常出现分离差、峰型不良及严重拖尾现象,因此选择合适的内源激素提取方法和色谱条件尤为重要[12]。本研究采用高效液相色谱法对鸭梨种子中的赤霉素(ga3)、吲哚乙酸(iaa)、脱落酸(aba)3种植物激素进行联合分离与测定,建立起灵敏、简便、快速测定植物种子激素的方法。
7、 2实验部分 2.1仪器、试剂与材料 1200型高效液相色谱仪(美国agilent公司),包括1200四元梯度泵、1200va公司);pvpp(sigma公司);甲醇(色谱纯,德国merck公司);乙酸、乙酸乙酯和石油醚(分析纯,天津大学科威公司);实验用水为超纯水。实验所选材料为北京市密云县不老屯镇燕落村的套袋鸭梨,于2008年9月16日采摘,于12℃预冷24h后,放入(0±1)℃冷库中贮藏。贮藏期间每隔一定时间随机选取40个,挑出种子进行测定。 2.2标准品的制备 分别准确称取0.01gga3、iaa和aba标样,用流动相溶解定容至100ml棕色容
8、量瓶中,作为母液(100mg/l),用
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