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《高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第6期2010年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry843~847研究简报DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00843高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素*123121闫师杰郭李维吴彩娥梁丽雅王继栋张丽娜12(天津农学院食品科学系,天津300384)(山西农业大学食品科学与工程学院,太谷030801)3(南京林业大学森林
2、资源与环境学院,南京210037)摘要建立了高效液相色谱同时测定鸭梨种子中3种内源激素赤霉素(GA3)、生长素(IAA)和脱落酸(ABA)含量的方法。采用C18反相色谱柱,柱温35,以甲醇水(含1%乙酸)(46,V/V)为流动相,流速为1mL/min,检测器波长开始用254nm,2.5min时将波长切换至210nm,至3.8min,GA3出峰结束后,再次将波长切换回254nm测定IAA和ABA。GA3、IAA和ABA的平均回收率分别为92.8%、91.6%和94.7%。为快速、准确分离和
3、测定鸭梨种子内源激素提供了一种可靠方法。关键词高效液相色谱;内源激素;鸭梨;种子1引言果实的生长成熟是一个复杂的生理生化过程,植物激素与果实的发育及成熟程度有关,而种子又是[1]激素合成的主要场所,因此,掌握内源激素在种子中的变化规律,对研究水果在采摘后的生理、成熟、[2]衰老及褐变过程具有重要意义。植物激素在植物体内含量甚微,而且其在植物体内的组成复杂,相互共存的干扰组分多,对温度等[3]条件敏感,因而对植物激素的测定比较困难。高效液相色谱(HPLC)是较理想的植物内源激素分析[4][5]
4、[6][7][8]方法,植物激素的HPLC测定已在仁用杏花芽、甜樱桃、梨等果实,油菜、莴苣等籽粒上有所[9][10][5][11][6]应用,对植物种子方面,主要集中在银杏、山楂、甜樱桃、五味子、早蜜梨和黄金梨等种子的激素含量测定上,而对鸭梨种子中激素的分离、测定还未见。由于在联合测定植物组织抽提液中的多种内源激素时,经常出现分离差、峰型不良及严重拖尾现象,因此选择合适的内源激素提取方法和色谱条[12]件尤为重要。本研究采用高效液相色谱法对鸭梨种子中的赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(
5、ABA)3种植物激素进行联合分离与测定,建立起灵敏、简便、快速测定植物种子激素的方法。2实验部分2.1仪器、试剂与材料1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司),包括1200四元梯度泵、1200VWD检测器、HPLC2D工作站;KQ3200E型超声波清洗仪(昆山市超声仪器厂);RE2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);GA3、IAA和ABA标样(纯度99%,Sigma公司);PVPP(Sigma公司);甲醇(色谱纯,德国Merck公司);乙酸、乙酸乙酯和石油醚(分析纯,天津大学
6、科威公司);实验用水为超纯水。实验所选材料为北京市密云县不老屯镇燕落村的套袋鸭梨,于2008年9月16日采摘,于12预冷24h后,放入(01)冷库中贮藏。贮藏期间每隔一定时间随机选取40个,挑出种子进行测定。2.2标准品的制备分别准确称取0.01gGA3、IAA和ABA标样,用流动相溶解定容至100mL棕色容量瓶中,作为母20091227收稿;20100315接受本文系国家自然科学基金资助项目(No.30600424)资助*Emai:lyanshijie@126.com844
7、分析化学第38卷液(100mg/L),用以流动相、波长、柱温的选择和定性分析。以流动相为溶剂,分别配制100mg/LGA3、10mg/LIAA和2.5mg/LABA的工作液。2.3样品的制备样品前处理方法参照文献[13~15],并加以改进。称取鸭梨种子1.0g,液氮速冻并研磨成粉末,加入冷却的80%甲醇溶液10mL(内含10g/L的抗氧化剂BHT),放置4冰箱中过夜,浸提液以13000r/min离心15min得上清液,残渣按18和14(w/V)分别加入80%甲醇8和4mL,重复浸提两次
8、,合并3次所得的上清液,全部滤液于35减压浓缩至原体积1/3,再用1mol/LNa2HPO4调节至pH=8.0,加入等体积石油醚萃取脱色3~5次,弃去酯相后,加入0.1g聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)吸附酚类物质,常温下摇床振荡30min,过滤弃去PVPP,滤液用2mo1/L柠檬酸调节至pH=3,再用等体积乙酸乙酯萃取3~5次,合并酯相,于35减压浓缩至干,所得残留物加入3mLpH3.5磷酸盐缓冲液溶解,过SepPakC18预处理小柱,进一步纯化GA3、IAA和ABA,用80%
