毕业论文--高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素

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1、高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素作者：闫师杰郭李维吴彩娥梁丽雅王继栋张丽娜【摘要】　　建立了高效液相色谱同时测定鸭梨种子中3种内源激素赤霉素(GA3)、生长素(IAA)和脱落酸(ABA)含量的方法。采用C18反相色谱柱，柱温35℃，以甲醇水(含1%乙酸)(4∶6，V/V)为流动相，流速为1mL/min，检测器波长开始用254nm，2.5min时将波长切换至210nm，至3.8min，GA3出峰结束后，再次将波长切换回254nm测定IAA和ABA。GA3、IAA和ABA的平均回收率分别为92.8%、91.6%和94.7%。为快速、准

2、确分离和测定鸭梨种子内源激素提供了一种可靠方法。【关键词】高效液相色谱;内源激素;鸭梨;种子　　AbstractAhighperformanceliquidchromatographic(HPLC)methodforthesimultaneousdeterminationofthreekindsofendogenoushormonegibberellin(GA3),auxin(IAA)andabscisicacid(ABA)contentinseedsofpostharvestYalipearwasdescribed.Thechromatog

3、raphicseparationwascarriedoutonareversephaseC18columnusingmethanol∶water(containing1%aceticacid)=4∶6asthe12mobilephaseatacolumntemperatureof35℃.Theflowratewas1mL/min.UVdetectionat210nmwasusedforseparationGA3from2.5minto3.8min,whiledetectionat254nmwasusedfortheremainingsepara

4、tions.Averagerecoverieswere92.8%,91.6%and94.7%forGA3,IAAandABA.Itshowsareliablemethodforrapid,accurateseparationanddeterminationendogenoushormoneinYalipearseeds.　　KeywordsHighperformanceliquidchromatography;Endogenoushormones;Yalipear;Seed　　1引12言　　果实的生长成熟是一个复杂的生理生化过程，植物激素与果实

5、的发育及成熟程度有关，而种子又是激素合成的主要场所[1]，因此，掌握内源激素在种子中的变化规律，对研究水果在采摘后的生理、成熟、衰老及褐变过程具有重要意义[2]。　　植物激素在植物体内含量甚微，而且其在植物体内的组成复杂，相互共存的干扰组分多，对温度等条件敏感，因而对植物激素的测定比较困难[3]。高效液相色谱(HPLC)是较理想的植物内源激素分析方法，植物激素的HPLC测定已在仁用杏花芽[4]、甜樱桃[5]、梨[6]等果实，油菜[7]、莴苣[8]等籽粒上有所应用，对植物种子方面，主要集中在银杏[9]、山楂[10]、甜樱桃[5]、五味子[11]、

6、早蜜梨和黄金梨[6]等种子的激素含量测定上，而对鸭梨种子中激素的分离、测定还未见。由于在联合测定植物组织抽提液中的多种内源激素时，经常出现分离差、峰型不良及严重拖尾现象，因此选择合适的内源激素提取方法和色谱条件尤为重要[12]。本研究采用高效液相色谱法对鸭梨种子中的赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)3种植物激素进行联合分离与测定，建立起灵敏、简便、快速测定植物种子激素的方法。　　2实验部分　　2.1仪器、试剂与材料　　1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括1200四元梯度泵、1200VWD检测器、HPLC2

7、D工作站;KQ3200E型超声波清洗仪(昆山市超声仪器厂);RE2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);GA3、IAA和ABA标样(纯度≥99%，Sigma公司);PVPP(Sigma公司);甲醇(色谱纯，德国Merck公司);乙酸、乙酸乙酯和石油醚(分析纯，天津大学科威公司);实验用水为超纯水。实验所选材料为北京市密云县不老屯镇燕落村的套袋鸭梨，于2008年9月16日采摘，于12℃预冷2412h后，放入(0±1)℃冷库中贮藏。贮藏期间每隔一定时间随机选取40个，挑出种子进行测定。　　2.2标准品的制备　　分别准确称取0.01gGA3、IA

8、A和ABA标样，用流动相溶解定容至100mL棕色容量瓶中，作为母液(100mg/L)，用以流动相、波长、柱温的选择和定性分析。以流动相为溶剂，分别配制