高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素论文

《高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素论文闫师杰郭李维吴彩娥梁丽雅王继栋张丽娜【摘要】建立了高效液相色谱同时测定鸭梨种子中3种内源激素赤霉素(GA3)、生长素(IAA)和脱落酸(ABA)含量的方法。采用C18反相色谱柱，柱温35℃，以甲醇水(含1%乙酸)(4∶6，V/V)为流动相，流速为1mL/min，检测器波长开始用254nm，2.5min时将波长切换至210nm，至3.8min.freel测定IAA和ABA。GA3、IAA和ABA的平均回收率分别为92.8%、91.6%和94.7%。为快速、准确分离和测定鸭梨种子内源激素提供了一种可靠方法。【

2、关键词】高效液相色谱;内源激素;鸭梨;种子AbstractAhighperformanceliquidchromatographic(HPLC)methodforthesimultaneousdeterminationofthreekindsofendogenoushormonegibberellin(GA3),auxin(IAA)andabscisicacid(ABA)contentinseedsofpostharvestYalipearatographicseparationnusingmethanol∶obilephaseatacolumntem

3、peratureof35℃.ThefloL/min.UVdetectionat210nm2.5minto3.8min,ainingseparations.Averagerecoveriesethodforrapid,accurateseparationanddeterminationendogenoushormoneinYalipearseeds.Keyanceliquidchromatography;Endogenoushormones;Yalipear;Seed1引言果实的生长成熟是一个复杂的生理生化过程，植物激素与果实的发育及成熟程度有关，而种子又

4、是激素合成的主要场所1，因此，掌握内源激素在种子中的变化规律，对研究水果在采摘后的生理、成熟、衰老及褐变过程具有重要意义2。植物激素在植物体内含量甚微，而且其在植物体内的组成复杂，相互共存的干扰组分多，对温度等条件敏感，因而对植物激素的测定比较困难3。高效液相色谱(HPLC)是较理想的植物内源激素分析方法，植物激素的HPLC测定已在仁用杏花芽4、甜樱桃5、梨6等果实，油菜7、莴苣8等籽粒上有所应用，对植物种子方面，主要集中在银杏9、山楂10、甜樱桃5、五味子11、早蜜梨和黄金梨6等种子的激素含量测定上，而对鸭梨种子中激素的分离、测定还未见。由于在联合测定

5、植物组织抽提液中的多种内源激素时，经常出现分离差、峰型不良及严重拖尾现象，因此选择合适的内源激素提取方法和色谱条件尤为重要12。本研究采用高效液相色谱法对鸭梨种子中的赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)3种植物激素进行联合分离与测定，建立起灵敏、简便、快速测定植物种子激素的方法。2实验部分2.1仪器、试剂与材料1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括1200四元梯度泵、1200Verck公司);乙酸、乙酸乙酯和石油醚(分析纯，天津大学科威公司);实验用水为超纯水。实验所选材料为北京市密云县不老屯镇燕落村的套袋鸭梨，于20

6、08年9月16日采摘，于12℃预冷24h后，放入(0±1)℃冷库中贮藏。贮藏期间每隔一定时间随机选取40个，挑出种子进行测定。2.2标准品的制备分别准确称取0.01gGA3、IAA和ABA标样，用流动相溶解定容至100mL棕色容量瓶中，作为母液(100mg/L)，用以流动相、波长、柱温的选择和定性分析。以流动相为溶剂，分别配制100mg/LGA3、10mg/LIAA和2.5mg/LABA的工作液。2.3样品的制备样品前处理方法参照文献13～15，并加以改进。称取鸭梨种子1.0g，液氮速冻并研磨成粉末，加入冷却的80%甲醇溶液10mL(内含10μg/L的抗

7、氧化剂BHT)，放置4℃冰箱中过夜，浸提液以13000r/min离心15min得上清液，残渣按1∶8和1∶4(L，重复浸提两次，合并3次所得的上清液，全部滤液于35℃减压浓缩至原体积1/3，再用1mol/LNa2HPO4调节至pH=8.0，加入等体积石油醚萃取脱色3～5次，弃去酯相后，加入0.1g聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)吸附酚类物质，常温下摇床振荡30min，过滤弃去PVPP，滤液用2mo1/L柠檬酸调节至pH=3，再用等体积乙酸乙酯萃取3～5次，合并酯相，于35℃减压浓缩至干，所得残留物加入3mLpH3.5磷酸盐缓冲液溶解，过SepPakC18预

8、处理小柱，进一步纯化GA3、IAA和ABA，用80%甲醇洗脱收集后，在40～43