高效液相色谱-串联质谱同时测定毛竹笋中4种内源性植物激素.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第11期2013年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1739～1743DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30610高效液相色谱-串联质谱同时测定毛竹笋中4种内源性植物激素钟冬莲丁明汤富彬莫润宏滕莹(中国林科院亚热带林业研究所，国家林业局经济林产品质量检验检测中心(杭州)，富阳311400)摘要建立了同时检测毛竹笋中赤霉素、脱落酸、吲哚一3一乙酸和吲哚一3一丁酸4种内源性植物激素的高效液相色谱．串联质谱(

2、HPLC—MS／MS)方法。竹笋样品经甲醇．甲酸溶液(99：I，WV)提取后，C固相萃取柱净化，采用反相C，色谱柱分离。以超纯水和甲醇溶液作为流动相进行梯度洗脱，采用多反应监测离子模式(MRM)进行定性分析，基质标准曲线外标法进行定量分析，线性范围在2—200g／L之间。在5，50和200kg添加水平下，4种内源植物激素的回收率为75．2％～105．0％；相对标准偏差为0．8％～11．4％。本方法的定量限为0．1～1．0g／kg。关键词液相色谱一串联质谱法；内源植物激素；毛竹笋1引言植物内源激素对植物生长和发育起

3、着非常重要的调节和控制作用．2J。毛竹(Phyllostachyshetero．cyclaCVpubescens)在我国分布广，生长快，产量高，用途广，是经济价值较高的竹种之一。毛竹笋体的生长极其迅速，在快速生长阶段，日平均生长量为35～50cm，在高峰时可达1m。毛竹笋的这种生长发育和内源植物激素呈显著的相关性曲J。目前，测定内源植物激素的方法主要有气相色谱一质谱联用法(GC／MS)和液相色谱法(HPLC)及液相色谱．串联质谱法【“等。液相色谱．质谱联用技术具有准确、高效和高灵敏度的优点，符合目前检测领域所追求

4、的快速高效的要求，目前还未见液相色谱．串联质谱法用于同时检测竹笋中的内源植激素的报道。本研究以毛竹笋为研究对象，建立了液相色谱一串联质谱(HPLC—MS／MS)方法测定毛竹笋中赤霉素、脱落酸、吲哚一3一乙酸和吲哚一3一丁酸4种内源性植物激素的检测方法，并对提取溶剂、净化用的固相萃取小柱及过柱液中甲醇浓度进行了评价。本方法灵敏度高、重现性好。能够满足实际毛竹笋样品中的内源植物激素的分析，为毛竹林高效培育提供技术支持。2实验部分2．1仪器、材料与试剂QuattroPremierXE三重四极杆液质联用仪(美国Water

5、s公司)；固相萃取装置(美国Agilent公司)；C固相萃取小柱(500mg／6mL，美国Agilent公司)；IKARV10Control旋转蒸发仪(德国IKA公司)；Milli．QGradient超纯水仪(美国密理博公司)；AB104．S0．1mg分析天平(瑞士梅特勒公司)。赤霉素(GA)、吲哚-3-乙酸(IAA)和吲哚．3一丁酸(IBA)标准品(德国Dr．Ehrenstorfer公司)；脱落酸(ABA，含量≥98．5％，美国Sigma公司)O甲醇(HPLC级，德国MERCK公司)，甲酸(HPLC级，美国RO

6、E公司)，实验用水为二次净化水。2．2标准溶液的配制分别准确称取赤霉素、脱落酸、吲哚一3-乙酸和吲哚-3_丁酸标准品0．01g(精确至0．1mg)，以甲醇溶解并定容至100．0mL，配成100mg／L单标母液。用甲醇稀释至1000g／L的混合标准溶液，再分别用基质逐级稀释，配制成2，10，20，60，100和200g／L的标准工作液。2013-06-27收稿；2013-08-14接受E—mail：tfb22@163．corn1740分析化学第41卷2．3实验条件色谱条件：WatersSymmetryCls色谱柱(

7、150mmX3．9mm，5m)；柱温：35oC；进样量：10；流动相A：超纯水；流动相B：甲醇；流速为0．3mL／min；洗脱程序为：0～2min，90％A；2～4rain，90％一50％A；4—6min，50％～0％；6～12min，0％A；12—14min，0％～90％A：14～15rain，90％A。质谱条件：电喷雾离子源负离子模式(ESI一)；毛细管电压：3．0kV；离子源温度：80℃；脱溶剂气温度为350℃；脱溶剂气流量：550L／h；锥孔气流量：50L／h；扫描方式：多反应监测MRM。其它参数见表1。

8、MRM色谱图见图1。表1检测4种植物激素的质谱参数Table1MS／MSparametersfordeterminationoffourphytohormones一一0蠹口T1《一一00写IInq《：定量离子(Quantificationions)．GA3：Gibberellin；IBA：3-Indolebutyricacid；ABA：Abscisicacid；IAA：I