高效液相色谱-串联质谱测定花生油中的黄曲霉毒素.pdf

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1、高效液相色谱一串联质谱测定花生油中的黄曲霉毒素刘立萍1邱启东1刘晓姗2(1．广东产品质量监督检验研究院，广东顺德528300；2．广州焙乐道食品有限公司，广东广州511480；)摘要：用乙酸一水提取液体系提取花生油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，以高效液相色谱一串联质谱法测定，对不同比例的乙酸与水对花生油中黄曲霉毒素的提取效率进行研究。结果发现，以2％乙酸一水为提取液提取效果较好，回收率均在80～110％-e．_N，方法检出限(S／N=3)均为0．5卜g／kg。关键词：UPLC—MS／MS；花生油；黄曲霉毒素黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒代谢产物，具有很

2、强毒性，能强烈破坏人和动物的肝脏组织，严重时会导致肝癌甚至死亡⋯。已经鉴定的黄曲霉毒素有20多种，主要有Bl、B2、G1、G2以及另外两种代谢产物Ml、M2。在天然污染食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。花生是最容易被黄曲霉污染的粮食，所以花生制品花生油的黄曲霉毒素含量检测具有现实意义”。31。目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、微柱法、高压液相色谱法、ELISA法和免疫亲和柱法等”1。本文试图研究不同体积比乙酸一水溶液作为提取液对花生油中黄曲霉毒素的提取效果，通过对空白样品加标，尝试合适前处理方法，借助高效液相色谱一串联质谱仪测回收率，以寻找合适浓

3、度的提取液。1实验部分1．1仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪(Agilent1200)；高速冷冻离心机(美国Sigma公司)；净化柱(AgilentBondElut—PH，500mg3mL，50／PK)；移液枪(美国ThermoScientific公司)；ML204／02型电子天平(梅特勒上海有限公司)；黄曲霉毒素B1、B2、GI、G2标准品(单标，浓度均为2．0肛∥mL，北京中科质检生物技术有限公司)；乙腈；冰乙酸；二级水。1-2实验方法1．2．1标准溶液的配制将黄曲霉毒素B1、B2、GI、G2标准品用乙腈稀释为200斗∥L的混合标准溶液，再用乙腈：水(10：90)依次稀释配

4、制成浓度分别为100．0、50．0、20．0、10．0、5．0、2．0、1．0

5、Lg／L的标准工作溶液，乙腈：水(10：90)为实验空白。1．2．2样品前处理方法用移液枪称取散装花生油样29(精确到0．00019)于50mL离心管中，加入10mL提取液，用涡旋器涡旋2min，于高速冷冻离心机内8000dmin离心2min。水相转移到另_离心管中，再加5mL提取液重复提取一次，合并水相，过净化柱，用lmL乙腈：水(10：90)定容，滤膜过滤，供高效液相色谱一串联质谱分析”1。过净化柱方法：先加lOmL甲醇活化净化柱，加6mL$N应浓度提取液润洗，过样品提取液(合并后的水相)，再

6、依次加入6mL相应浓度提取液、6mL水洗涤，用水泵充分抽干净化柱，最后力H9mL三氯甲烷洗脱并收集洗脱液，45℃恒温氮气吹干。1．23色谱条件色谱柱AgilentEclipseplus．C18(2．1mm×100ram)，1．8斗m；进样体积5斗L；流速0．2mffmin；柱温40℃。梯度变化为线性变化，流动相A为乙腈，流动相B为V(甲酸)：V(水)=0．1：99．9。色谱分离梯度条件如下：T=0．00min时A为10％，B为90％IT=3．00min时A为30％，B为70％；T=8．00min时A为100％，B为0％；T=8．10min时A为10％，B为90％；T=10．0

7、0min时A为10％，B为90％；1．2．4质谱条件电喷雾离子源(ESt)；正离子扫描模式；多反应监测(MRM)模式l源温度150℃；毛细管电压2．82kV；脱溶剂气温度500℃；脱溶剂气流量800L／h；碰撞气流量0．13mUmin。其他参数见表l(注：*为定量离子)。表1黄曲霉毒素的保留时间及串联质谱检测参数目标保留时问／母离子子离子锥孔电碰撞能量／物Ⅱ∞压／VeV241．1+Bl6．00313．2502436285．0259．1+B25．80315．2462824287．1199．8．G15．72329．2444026243．0217．0+G25．49331．24636

8、30245．02结果与讨论2．1线性范围与检出限为了提高方法的可靠性和结果的准确度，本方法采用空白基质溶液作为稀释液配制系列标准工作溶液的方法消除基质效应的影响。各浓度标准溶液分别进样检测，以定量离子测定(下转第127页)2016年5N化暑彳珂I125安全教育，可以采用学习安全文件、典型案例、安全通报等形式，充分提高员工的安全意识。(2)加强安全责任意识的教育，在装卸、搬运时做好安全工作，保证仓库工作人员在工作过程中的人身安全，杜绝安全事故的发生。(3)开展隐患排查，定期进行安全大检查，重点对仓库设施、