肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究论文

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1、肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究论文都红蕾，孙奋勇，陈勍，潘秋辉【摘要】目的观察肝细胞生长因子（HGF）对子宫内膜癌细胞HEC2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC2B中HGF受体Cmet的表达，了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC2B，用RTPCR的方法检测HEC2B中HGF受体Cmet有表达。对HEC2B进行24h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果Cmet在HEC2B细胞中稳定表达，HG

2、F促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系，各处理组与对照组相比.freelL-1时，增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/Cmet能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。【关键词】子宫内膜癌细胞；肝细胞生长因子；肝细胞生长因子受体Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofhepatocytegroetrialcancercells,detectthealterationsofcellproliferationandexpressionlevelofHGFreceptorCmetandunderstandthemolecularme

3、chanism.MethodsEndometrialcancercellline,HEC2BetinHEC2BinedinedetotedtheproliferationofHEC2Binadosedependentmanner(P0.05).TreatmentL-1HGFincreasedtheproliferationlevelby1.9fold.ConclusionCmetetsystempromotedtheformation,developmentandproliferationofendometrialcancercellsinvitro.Keyetr

4、ialcancercell;hepatocytegroet是一跨膜蛋白，由原癌基因Cmet编码。在许多恶性肿瘤中Cmet被过表达［1-6］。HGF/Cmet与子宫内膜癌的关系却鲜有报道。本研究通过观察子宫内膜癌细胞中Cmet的表达及HGF对子宫内膜癌细胞的作用，旨在为临床以HGF／Cmet为靶点治疗子宫内膜癌提供理论基础。1材料与方法1.1试剂与细胞株子宫内膜癌细胞株HEC2,购自中科院细胞库;RNase、胰蛋白酶、DMEM培养基、Trizol、逆转录酶SuperscriptⅢ为Invitrogen公司产品;优质胎牛血清,Gibco公司;HGF购自RD，Agar

5、ose、G418由Sigma公司提供。PCR用酶SYBRGreenPCRMasterMix购自ABI公司。EPICSALTRA流式细胞仪,美国BeckmanCoulter公司提供。1.2HEC2B细胞的体外培养与诱导将细胞以1×105/cm2接种于细胞培养瓶中，每瓶加入5mL含10%(φ)FBS（胎牛血清）的DMEM；培养24h后，换5%FBS的DMEM饥饿培养12h，分别加入浓度为20、40、60、80、100ng·mL-1的HGF进行处理，设置空白组不进行诱导，培养基中FBS的浓度改成5%；培养48h后收集细胞。1.3PCR用PBS清洗细胞，用Trizol法抽提RNA

6、，并常规检测RNA的纯度及完整性。反转录，用人的βactin基因检测反转录是否成功。PCR条件为：94℃5min激活聚合酶，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃45s，共33循环，72℃保温10min，4℃保温10min。采用琼脂糖凝胶检测的方法进一步验证。Realtime定量PCR条件为：95℃5min激活聚合酶，95℃变性15s，57℃退火5s，72℃25s，共45循环。采用ABI7300系统进行检测，每个循环结束检测荧光强度。融解曲线分析:每分钟读1次，检测范围为55℃到95℃。荧光强度检测采用动态跟踪的方法，自动测出Ct值（每个反应管内的荧光信号到达所设定的

7、域值时所经历的循环数），用2△△Ct表示实验组目的基因的表达相对于对照组的变化倍数，并采用琼脂糖凝胶检测的方法进一步验证。Βactin引物序列如下：上游引物5′gctcttttccagccttcctt3′,下游引物5′tgatccacatctgctggaag3′。Cmet检测引物序列：上游引物5′ttcaagtagccaaagcgatg3′,下游引物5′gtgtttacgtcaggataag3′。Cmet检测引物序列：上游引物5′ttcaagtagccaaagcgatg3′,下游引物5′