errγ介导雌激素对子宫内膜癌细胞增殖作用论文

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1、·中文论著摘要·ERRy介导雌激素对子宫内膜癌细胞的增殖作用目的运用RNAi技术，将构建的ERRyshRNA表达质粒转入Ishikawa细胞，探讨ERR]'沉默后对子宫内膜癌生物学特性及雌激素处理前后ERK的活化情况，初步阐明ERR7在子宫内膜癌发病机制中的作用以及与子宫内膜癌发生与发展的关系。方法构建含有ERR,／shRNA的表达载体，用含有ERR7shRNA的表达载体转染Ishikawa细胞，用RT-PCR方法观察转染前后子宫内膜癌Ishikawa细胞中ERR],mRNA的表达情况；应用免疫荧光、流式细

2、胞技术及Westernblot方法分析下调子宫内膜癌Ishikawa细胞中ERR7的对雌激素促增殖作用的影响。馇里=日木l、RT-PCR分析了Ishikawa细胞中ERR],表达情况，结果表明仅有ERR72表达。2、构建针对ERR72shRNA序列，亚克隆到pRNAi—U6．1／Neo载体中，稳定转染，获得稳定的低表达ERR但的Ishikawa细胞。3、免疫荧光结果显示：下调Ishikawa细胞中ERR,／2的表达可以明显诱导Ishikawa细胞发生凋亡，并且抑制了Ishikawa细胞对雌激素的反应性。4、

3、流式细胞技术显示同样的结果：未转染细胞组，雌激素作用前的细胞凋亡率为23．51％，雌激素作用后的细胞凋亡率为9，78％；ERR],shRNA细胞组，雌激素作用前的细胞凋亡率为11．68％，雌激素作用后的细胞凋亡率为13．73％。5、WesternBlot结果表明，雌激素可以使细胞内ERK活化，而下调了ERRy2的水平则抑制了雌激素的作用。结论三日J，匕ERRs,-shRNA(2，3)表达质粒对ERR],基因表达有沉默作用。ERR],基因表达沉默后能抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖，促进其凋亡，雌激素通

4、过ERRs,对子宫内膜癌Ishikawa细胞起到促增殖作用，初步证实了ERR7在子宫内膜癌细胞的发生和发展中发挥重要的作用。关键词Ishikawa细胞，子宫内膜癌，ERR7，RNA干扰，转染2·英文论著摘要·EstrogenmediatedbyERRypromotesendometri--amcell7SproliferationObjectivesConstructingERRTsiRNAplasmidandtransfectitintoIshikawacells．ApplyingforRNAitecho

5、nologytomakeERRs／koekdownandinvestigateendometrium’Sbionomics．ThenobservetheactivitationofERKaftertreatmentofestrogen．Initiallyillustratetheeffectofestrogenonpathologymechanismofendometriumcanceranditsrelations诵tllendometrium’Sdevelopment．MethodsIdentifica

6、tionoftheexpressionofERKbeforeandaftertransfectionofplasmidvectorcontainingERR7shRNAintoIshikawabyRT-PCR．ApproachIshikawacell’SapoptosisandERKactivitationcircumstancesbyIEFACSandWestern—Blotbeforeandaftertreatmentofestrogen．Results1．Designthreepairsprimers

7、forthreesubtypeofERR-／genereferringtOGenebank，amplifytheirgenefragmentsseparately．TheresultisthatwechoosetheERRs,2asexperimentalprimer．2．ConstructingvectorwithERR7shRNAsandsequencing，theresultsareaccordancewithourexpectation．TransfectthreeERRTshRNAintoIshi

8、kawacellofwhichERRTshRNA2，3knockERR7genedownsuccessfully．SowechooseERRyshRNA3plasmidasconsequentexperimentalmaterial．3．IFshowsthatuntransfectedandNo—silenceshRNAcellswhoaretreatedbyestrogenhavelessapoptosispe