rnai沉默pelpi mnar基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用

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1、第34卷第6期中山大学学报(医学科学版)Vo1．34No．62013年11月JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES)Nov．2013．基础研究·RNAi沉默PELPI／MNAR基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用万琛．李小毛(中山大学附属第三医院妇科，广东广州510630)摘要：【目的】构建脯氨酸一谷氨酸一亮氨酸富集蛋白1(PELP1)基因慢病毒表达载体，研究沉默PELP1／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子(PELP1／MNAR)基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】构建合成靶向PELP

2、1／MNARRNAi慢病毒表达载体，并转染子宫内膜癌Ishikawa细胞，Real—timePCR和westernblot检测PELP1／MNARmRNA和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入E2的培养基培养各组细胞，MTI"检测各组细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞生长周期情况；Westernblot检测ER下游靶基因c—fos，cyclinD1的蛋白表达水平。【结果】成功构建合成靶向PELP1／MNARRNAi慢病毒表达载体，转染子宫内膜癌Ishikawa细胞，转染后PELP1／MNARmRNA的表达和蛋白的表达分别下降86％和65％(P<0．05)。转染后I

3、shikawa细胞与对照组相比增殖抑制(P<0．05)，细胞周期G0／G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少(P<0．05)。加入雌激素后，三组细胞的生长速度加快，细胞S期的比例增加，转染组增殖抑制明显(P<0．05)，S期比例降低(P

4、／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子；慢病毒中图分类号：R73文献标志码：A文章编号：1672—3554(2013)06—0811-08EfectsofSilencingPELP1／MNARExpressionbyRNAInterferenceonProliferationandCellCycleofEndometrialCancerCellsWANJing，LIXiao—mao(DepartmentofGynecology，TheThirdAffiliatedHospital，SunYat—SunUniversity，Guangzhou510630，China

5、)Abstract：【Objective】ToestablishalentiviralvectorbasedRNAinterferenceexpressionsystemtargetingPELP1／MNARtoobtainstabletranscriptknockdown，andinvestigatetheeffectofdown—regulationofPELP1／MNARonproliferation，cellcycleofendometrialcancercellwithorwithoutestrogenstimulation，anditsmechani

6、sms．【Methods】TheshRNAoligonueleotidestargetingtoPELP1／MNARgeneweresynthesizedandclonedtogenerateshRNAlentivirusexpressivevectors．EndometrialcancercellIshikawawastransfected．andgenesilencingeffeetwasdeterminedbyrea1．timePCRandWesternblotanalysisonthelevelofmRNAandprotein．Withorwithout

7、E2stimulation，theproliferationrateoftransfectedIshikawacellsweredetectedbyMq3"；cellcycleweremeasuredbyflowcytometry．rr}leproteinexpressionoftheERtargetgenecofos，cyclinD1weredetectedbyWesternblot．【Result】TheRNAilentivimsexpressionvectortargetingPELP1／MNARsequencewereconstructedandthee

8、ndometrialca