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1、他莫昔芬对子宫内膜癌细胞株增殖的影响【摘要】目的探讨他莫昔芬（Tamoxifen,TAM）对人子宫内膜癌Ishikawa细胞体外增殖的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法研究他莫昔芬对Ishikawa细胞增殖的影响。结果TAM浓度为1×10-8～1×10-6mol/Ｌ时,呈剂量依赖性促进Ishikawa细胞的增殖，TAM浓度为1×10-5mol/Ｌ时,可抑制细胞的增殖。而且这种促进作用呈现剂量—时间—效应关系。结论低浓度的TAM具有促进子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞增殖的作用。【关键词】他莫昔芬Ishikawa细胞培养TheEffectonProliferation
2、ofHumanEndometrialCarcinomaCellbyTamoxifenYANGYi1,XUEXiao-ou2(1.LiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001China；2.TheAffiliatedDongfangHospitalofBeijingTraditionalMedicalUniversity,Beijing100078China)【Abstract】ObjectiveToexploretheproliferationofhumanendometrialcarcinomacellIshikawabytamoxifenin
3、vitro.MethodsMTTassaywasadoptedtodeterminetheproliferationinducedbyTAM.ResultsAtlowerconcentration(1×10-8～1×10-6mol/Ｌ),Tamoxifenstimulatedtheproliferationofhumanendometrialcarcinomacell.Whileathigherconcentration(1×10-8mol/Ｌ),tamoxifenrestraintheproliferation.Thedoseandtimed
4、ependenteffectcanbefoundinthisexperiment.ConclusionsTamoxifencanstimulatetheproliferationofhumanendometrialcarcinomacelllineatlowerconcentration.【Keywords】tamoxifen;Ishikawa;cellculture20世纪80年代开始，他莫昔芬广泛地用于雌激素受体阳性的早期乳腺癌术后的辅助治疗。现已明确,TAM在乳腺组织中发挥雌激素受体拮抗剂的作用,但在子宫内膜、肝、骨等组织中发挥雌激素样作用,这种差别的机理尚不清楚。但越来越
5、多的研究发现,乳癌术后长期应用TAM可以引起子宫良性病变(内膜息肉、内膜增生或子宫肌瘤增大等)甚或子宫内膜癌。本实验研究TAM对子宫内膜癌细胞株生长的影响。对TAM的作用及机制进行了初步的探讨，以期从理论上证实临床上利用TAM治疗乳腺癌时可能会引起子宫内膜的病变。1材料与方法1.1材料人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞株由北大人民医院惠赠，他莫昔芬、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜（DMSO）购于Sigma公司，RPMI-1640培养基为美国Gibco公司产品，胎牛血清为杭州四季青血清。胰酶和EDTA均购于Ameresco公司。将TAM溶解在无水乙醇中，配成1×
6、;10－3mol/L的储备液，放入-20℃冰箱备用，实验时用含10%小牛血清的RPMI-1640培养基稀释，使无水乙醇的终浓度在0.1%以下，预实验表明含终浓度0.1%的乙醇培养基对细胞生长无明显影响。1.2细胞培养Ishikawa细胞使用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液，在37.0℃、5％CO2中培养。细胞可贴壁生长，待细胞贴满底壁的80％左右时传代。传代时，移去旧培养液，PBS液冲洗2次，用0.25%胰酶和0.02％EDTA的混合消化液消化，培养液重悬细胞于新培养瓶中，传代率为1∶2或1∶3。1.3细胞生长曲线细胞按常规传代方法离心悬浮后，在倒置显微镜下用记数板记数，
7、调整细胞密度为1×105/mL，以每个皿1mL的量接种于直径为35mm培养皿，在37℃、5%CO2培养箱继续培养。以接种当日为0d,自次日起,每天定点取细胞各3瓶,进行消化、收获、计数,取其平均值绘制生长曲线,连续测7d。按接种后第1天的平均细胞数/接种的细胞数,计算细胞的贴壁率。1.4MTT比色量效实验按上述培养方法得到的Ishikawa单细胞悬液,调整细胞密度为5×104/mL，在96孔培养板中每孔加入悬液180μL,置于37.0℃、5％CO2培
