KCA31通道对子宫内膜癌细胞增生影响的研究

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1、後旦大学学校代码：10246学号：03t108184博士学位论文KCa3．1通道对子宫内膜癌细胞增生影响的研究院专姓系：业：名：妇产科医院妇产科学王朕华指导教师：主塑宣塑壑论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了}身}意。作者签名论文使用授权声明本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，

2、允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：避导师签名：丝复旦大学博十学位论文KCa3．1通道对子宫内膜癌细胞增生影响的研究中文摘要子宫内膜癌在人的恶性肿瘤中排名第七，发病率大约为15—20／100，000，严重威胁妇女的健康和生命。随着科技和医疗的发展，子宫内膜癌的治愈率逐渐提高，但是特殊的病理类型和晚期子宫内膜癌五年的存活率还是很低。尽管对子宫内膜癌的病因和发病机理有许多学说，但其确切的发病机制仍不清楚。钙激活中电导

3、钾离子(KCa3．1)通道是钙激活钾离子通道家族中重要一员。近年研究表明：它在T淋巴细胞的激活和增生中发挥重要的功能及在某些肿瘤肿瘤的发生发展中起重要作用，但它与妇科肿瘤发生的关系以及对妇科肿瘤细胞生物学行为影响尚未见报道。本课题从研究钙激活中电导钾离子通道在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中表达入手，利用RNA干扰(RNAi)技术抑制了子宫内膜癌细胞株HEC一1一A中KCa3．1通道的表达，并运用westernblot、RT—PCR、流式细胞仪、Real-TimePCR、氚胸腺嘧啶核苷(3H—TdR)参入法、该通道

4、的各种阻断剂，膜片钳技术等研究KCa3．1通道在子宫内膜癌细胞增生和细胞周期中的作用及该通道的电生理特性。本课题共分三部分：①．KCa3．1通道在子宫内膜癌组织中表达；②．子宫内膜癌HEC-1-A细胞KCa3．1通道电生理特性及其对细胞生长的影响；③．KCa3．1通道阻断剂抑制人子宫内膜癌HEC一卜A细胞裸鼠移植瘤生长的研究。第一部分KCa3．1通道在子宫内膜癌组织中表达目的检测人的正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中KCa3．1通道的表达，研究它与子宫内膜癌的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)、Real

5、—TimePCR检测正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中KCa3．1通道mRNA的表达，Westernblot检测正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中KCa3．1通道蛋白的表达。结果13例正常子宫内膜标本组织中12例KCa3．1mRNA弱表达或不表达仅有l例中等表达；而25例子宫内膜癌标本组织几乎都表达KCa3．1mRNA(RT-PCR的结果和Real-TimePCR结果基本一致)，子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织Kca3．1mRNA表达差异具有统计学意义(P

6、a3．1蛋白仅有2例中等表达；而25例子宫内膜癌标本组织几乎都表达KCa3．1蛋白(仅4例KCa3．1蛋白弱表达或不表达)，子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织KCa3．1蛋白表达差异具有统计学意义(K0．01)。Westernblot和RT—PCR，Real—TimePCR结果基本一致。结论KCa3．1通道的过表达可能与宫内膜癌的发生发展有关。复日大学博}+学位论文第二部分子宫内膜癌HEc一1_^细胞KCa3．1通道电生理特性及其对细胞生长的影响目的探讨子宫内膜癌HEC一卜A细胞KCa3．1通道电生理特性和KCa3

7、．1通道对子宫内膜癌细胞生长调节作用及其可能机制。方法选择高表达KCa3．1通道的子宫内膜癌细胞株HEC—I-A和中等表达KCa3．1通道KLE作为研究对象。①利用膜片钳技术探讨不同浓度的、不同种类的阻断剂，不同浓度的钙离子和siRNA技术对HEC一卜A细胞KCa3．1通道电流的影响。②针对KCa3．1通道设计一对特异性siRNA和一对阴性对照(non—sliencing)，用RNAi抑制子宫内膜癌细胞中KCa3．1基因的表达，用FITC标记siRNA的转染效率和Westernbloting检测干扰的效率。③采用

8、流式细胞仪，细胞计数和氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入法等方法了解特异性抑制KCa3．1通道的表达和阻断剂阻断KCa3．1通道对HEC一1一A和KLE细胞增生和细胞周期的影响。④在特异性抑制KCa3．1通道的表达和阻滞剂阻断KCa3．1通道条件下，利用westernbloting技术检测了与细胞周期密切相关的CyclinDl蛋白的表达，初步探讨KCa3．1通道调节细胞生