sirna抑制hmgb1表达对子宫内膜癌细胞侵袭与迁移的影响

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1、万方数据中图分类号＆21UDC61O学校代码!Q53三密级公珏硕士学位论文siRNA抑制HMGBl表达对子宫内膜癌细胞侵袭与迁移的影响Effectofexpressionofhighmobilitygroupbox--1inhibitedbysmallhairpinRNAontheinvasionand"grationofhumanendometrial；arcinomaHEC．．1Aml2ratlonnen0etrialCarclnoa-cells作者姓学科专研究方学院(系、指导老论文答辩日期冯力元临床医学妇产科学湘雅医院吴佳捷教授中南大学湘雅医院二零一四年五月答辩委员会主席率名业向¨师眵

2、万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：三曼瘦竺日期：垄丝年上月革日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被

3、查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：7易移乏日期：j兰年』月罩日导师签名盟万方数据硕士学位论文中文摘要siRNA抑制HMGBl表达对子宫内膜癌细胞侵袭与迁移的影响中文摘要目的：探讨靶向HMGBl的shRNA对HMGBl表达改变的影响及其对子宫内膜癌HEC一1A细胞侵袭与迁移能力改变的影响。方法：运用RNA干扰技术，构建针对HMGBl基因的短发夹RNA(pshRNA一1／HMGB1、pshRNA一2／HMGB1、pshRNA-3／HMGB1)，同时设置转染空白质粒的阴性对

4、照组(HMGBl／p．NC)和脂质体转染组(Lipo组)，用脂质体法转染人子宫内膜癌细胞(HEC．1A)，利用反转录．聚合酶链反应(RT．PCR)和免疫印迹法(Westem．Blot)检测转染后48h各组细胞HMGBl在mRNA水平和蛋白水平的表达，Transwell小室法观察转染HMGBlshRNA后HEC．1A细胞的侵袭情况，细胞划痕实验观察转染HMGBlshRNA后HEC．1A细胞的迁移情况。结果：1、RT．PCR结果显示：针对HMGBl构建的三组重组质粒HMGBl一pshRNAs(1、2、3)转染后，HMGBlmRNA相对表达水平分别是0．1924-0．006，0．0554-0．00

5、2和O．1234-0．004，均较Lipo组(O．2684-0．008)和阴性对照组(0．2704-0．004)明显减少(P

6、5．8％，90．8％和70．2％。3、Transwell小室法检测细胞的侵袭能力显示：转染后48h，pshRNA2转染组穿膜细胞为(204-1)个，阴性对照组和Lipo组穿膜细胞数分别为(36+1)和(36士2)个。与阴性对照组比较，pshRNA2转染组穿膜细胞数明显减少(P<0．05)，差异有统计学意义；而Lipo组和HMGBl／p．NC组穿膜细胞数差异无统计学意义(P>O．05)。4、细胞划痕实验检测细胞迁移能力显示：划痕后培养48h，pshRNA2转染组细胞的迁移率为25．75％4-1．70％，脂质体转染组细胞的迁移率为65．25％4-1．70％，阴性对照组细胞的迁移率为64．75％4

7、-4．57％。与阴性对照组相比，pshRNA2转染组细胞迁移率明显降低(尸O．05)。结论：1、靶向干扰HMGBl的三组重组质粒在人子宫内膜癌细胞中均能有效下调HMGBl在mRNA和蛋白水平的表达，其中以pshRNA．2／HMGB1沉默效果最好。2、靶向干扰HMGBl的shRNA2转染子宫内膜癌细胞HEC．1A后细胞的侵袭与迁移能