siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究-论文.pdf

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1、·238··基础论著●siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究伊诺华文浩付丽华周明书许仲婷李振华许艳丽【摘要】目的探讨DKK1siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞；应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达；应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt

2、／13．catenin信号通路中活性13-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21．o0％(t=3．05，P<0．05)，DKK1蛋白表达降低39．35％(t=40．97，P<0．叭)。侵袭实验中DKK1RNAi组的细胞均数140．8±4．733，高于空白对照组的细胞均数123．7±6．700，癌细胞的侵袭能力增强13．82％。迁移实验中DKK1RNAi组细胞均数(152．0±3．528)高于空白对照组(130．6±4．061

3、)，癌细胞的迁移能力增强16．39％。DKK1siRNA处理后，细胞中活性~-catenin、MMP14荧光增强，提示表达水平上升。结论DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt／13．catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。【关键词】子宫内膜肿瘤；细胞运动；DKK1；Ishikawa细胞系；侵袭InfluencemechanismofsiRNA-mediatedDKK1lowexpressiononinvasionan

4、dmigrationabilitiesofendometriaIcarcinomaIshikawacelllinesY／Nuo，HUAWen—hao,FULi-hua,ZHOUMing·shu，XUZhong-ting,L1Zhen—hua,XUYan-li．DepartmentofObstetricsandGynecology,BeO'ingDitanHospital,CapimlMedicalUniversity,Beij'ing100015，ChinaCorrespondingauthor：YINu

5、o，Email：yinuo_76@126．com[Abstract]0bjectiveThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheinfluencemechanismofsiRNA-mediatedDKK1lowexpressiononinvasionandmigrationabilitiesofendometrialcarcinomaIshikawacelllines．MethodsCulturedendometrialcarcinomaIshikawacelllin

6、esweretransienttransfectedbyDKK1siRNA；mRNAandproteinlevelsofDKK1inthetransfectedcellsanduntransfectedcellsweredetectedbyrealtimePCRandwesternblotanalyses，respectively．InvasionandmigrationabilitiesofthetransfectedeeUsweredetectedbyTranswellassay．Expression

7、locationandprofilesofactive3-cateninandMMP14ofW_nt／D-cateninsignalpathwayincellsweredetectedbyimmunofiuorescence．ResultsExpressionofDKK1geneincellstransfected耐tllDKK1siRNAwasdown—regulatedby21．00percent(t-3．05．P<0．05)．ExpressionofDKK1proteinincellstransfe

8、ctedwithDKK1siRNAwasdown-regulatedby39．35percent(t=40．97，P<0．01)．Ininvasionassay，averagecellnumberinDKK1siRNAgroup(140．8~4．733)wasmorethanthatinBlankgroup(123．74-6．700)．Theinvasionabilityofthecellsincreasedby13．82pe