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《特异性ilk_sirna对膀胱癌ej细胞侵袭和迁移的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第33卷第4期第三军医大学学报Vo.l33,No.43602011年2月28日ACTAACADEMIAEMEDICINAEMILITARISTERTIAEFeb.282011论著文章编号:10005404(2011)02036005特异性ILKsiRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响朱军,高娟,李红彦,潘湘阳,陈俊霞(400016重庆,重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室,分子医学与肿瘤研究中心)[摘要]目的设计合成有效的ILKsiRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mR
2、NA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil1siRNA1、pGensil1siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil1siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RTPCR检测EJ细胞中ILKmRNA水平的表达,并通过Westernblot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILKmRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<005);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干
3、扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<005);与3个对照组比较,转染pGenSil1siRNA1与pGensil1siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP2及MMP9的表达水平明显降低(P<005)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。[关键词]RNA,小分子干扰;膀胱肿瘤;细胞系,肿瘤;侵袭;迁移;整合素连接激酶[中图法分类号]R39433;R73362;R737.14[文献标志码]ASilencinginte
4、grinlinkedkinasebysmallinterferingRNAinhibitsmetastasisandinvasionofhumanEJbladdercancercellsZhuJun,GaoJuan,LiHongyan,PanXiangyang,ChenJunxia(DepartmentofCellBiologyandGenetics,CenterofMolecularMedicineandCancerResearch,CollegeofBasicMedicalSciences,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,4
5、00016,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofthespecificsiRNAofintegrinlinkedkinase(ILK)onthemigrationandinvasionofhumanEJbladdercancercells.MethodsTwospecificsiRNAexpressionvectorsandonenonehomologycontrolvectortargetingtheobjectivegenewasconstructed.Thenthevectorsweretr
6、ansfectedintoEJcellsrespectively.RNAiefficiencyontheexpressionofILKwasevaluatedbyRTPCR,Westernblottingandimmunofluorescencestaining.Themorphologicalchange,celladhesion,migrationandinvasionability,andtheexpressionsofMMP2andMMP9ofthetransfectedcellsweredetected.ResultsEnzymedigestionandD
7、NAsequencingverifiedtheconstructedvectorswerecorrec.tInthe2specificsiRNAtreatmentgroups,theexpressionofILKwasobviouslyinhibited,thecellsspreadwel,lthenuclearmassratiowaslowerthancontro,lthecelladhesionabilitywasincreased,thecellmigrationandmetastasisabilityweredecre
