姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响论文

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1、姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响论文李伟宏焦金菊王青青常志杰【摘要】目的：探讨姜黄素对人子宫内膜癌细胞(HEC1B)增殖和凋亡的影响。方法：应用6.67～66.67μmol/L的姜黄素分别处理HEC1B48h后,采用MTT法检测姜黄素对HEC1B的增殖程度的影响；流式细胞仪进行细胞周期时相分析；荧光显微镜观察细胞核形态的变化。结果：①MTT法显示培养48h后，姜黄素组的吸光度值A490nm低于对照组(P0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性；②流式细胞仪检测显示培养48h后，姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P0.05)，且在一定浓度范围内呈剂量依赖性；③荧光

2、显微镜下给药组部分细胞发生凋亡形态学改变，凋亡率为10.22%～34.72%。结论：姜黄素可抑制HEC1B的增殖，诱导细胞凋亡，其诱导凋亡的机制可能是通过将细胞阻滞在G2/M期来实现的。【关键词】姜黄素；HEC1B；增值；细胞周期；凋亡姜黄（curcuma）是一种传统的中药，广泛用于食品上色和调味。姜黄素(curcumin)是从姜黄中提取的酚性色素.freela公司)；标准胎牛血清(standardFBS，天津灏洋生物制品科技责任有限公司，批号20071230)；AnnexinVFITC试剂盒(晶美生物工程有限公司)。1.2方法1.2.1细胞增殖的测定（MTT法）取对数期

3、生长的HEC1B，胰酶消化制成密度为5×106/L的细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μl。24h后细胞完全贴壁展开，更换培养液，分别设对照孔(不加姜黄素而加等量的培养液)、空白对照孔(不加细胞，其他条件与前相同)和不同浓度(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/L)姜黄素组，每组设12个复孔。将培养板移入CO2孵箱中，培养44h后，每孔加入5g/LMTT溶液10μl，37℃避光孵育4h，终止培养。吸去孔内培养液，每孔加入100μlDMSO溶解振荡15min，待结晶物充分溶解后(溶解呈蓝紫色)，酶标仪检测各孔吸光值（A490nm）。癌细胞生长抑制率=（1-实

4、验组A值/对照组A值）。1.2.2细胞周期检测取对数期生长的HEC1B，胰酶消化制成密度为5×106/L的细胞悬液，接种于15个培养瓶内，每瓶4mL，37℃培养箱中培养24h，细胞完全展开贴壁。此时换液，分别设对照组和不同浓度的(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/L)姜黄素组，每组3个样本。继续培养48h，终止培养。4℃预冷的PBS冲洗2次，用2.5g/l胰蛋白酶消化成悬液，离心8min，去上清，分别收集于15个EP管，每个EP管加碘化丙啶(PI)1mL，避光孵育15min，用流式细胞仪(FACS)分析细胞周期时相。1.2.3荧光染色凋亡细胞核形态观察取对

5、数期生长的HEC1B，胰酶消化制成密度为5×106/L的细胞悬液，接种于24孔培养板，每孔1.5ml。24h后细胞完全贴壁展开，更换培养液，分别设对照孔和不同浓度的(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/L)姜黄素组，每组4个复孔。继续培养48h，终止培养。移去培养基，用冷的PBS洗3次，4%的多聚甲醛固定30min，弃固定液，PBS冲洗3次，加5mg/LHoechst33258闭光染色15min,弃掉，PBS冲洗后荧光显微镜下观察细胞核形态，以核碎裂、核固缩、染色体断裂、凋亡小体形成和荧光强度增强等作为凋亡细胞指征。每张片随机选取4个高倍视野，计算凋亡细胞占

6、每个视野总细胞数的百分比，求出4个视野平均百分比，作为该样本的凋亡百分比，每组取3张盖玻片。1.2.4统计学分析实验数据以(±s)表示，应用SPSS11.5统计软件对资料进行单因素方差分析。P0.05表示差异有显著性意义，P0.01表示差异有非常显著性意义。2结果2.1姜黄素对子宫内膜癌细胞增殖的影响与未加药的对照组相比，给药各组癌细胞的A490nm值明显降低，差异有非常显著性意义(P0.01)，且在一定浓度范围内呈剂量依赖性，表明姜黄素对HEC1B增殖有抑制作用，见表1。表1姜黄素对子宫内膜癌细胞增殖的影响注：*P0.01,与对照组比较.ΔP0.01,与姜黄素Ⅰ,#P0.0

7、1,与姜黄素Ⅱ。2.2姜黄素对子宫内膜癌细胞周期时相的影响与对照组比较，姜黄素作用48h后，子宫内膜癌细胞G0/G1比例降低，G2/M期比例增高。在一定浓度范围内，G2/M期的比例随姜黄素浓度的增加而增加，并呈剂量依赖性，差异有显著性意义(P0.05)，见表2。表2姜黄素对子宫内膜癌细胞周期的影响注：*P0.05,与对照组比较.ΔP0.05,与姜黄素Ⅰ,#P0.05,与姜黄素Ⅱ。2.3姜黄素对HEC1B细胞凋亡的影响姜黄素各组作用48h后，荧光显微镜观察发现，与对照组比较，姜黄素各组细胞出