光动力诱导人子宫内膜癌细胞凋亡的研究

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1、光动力诱导人子宫内膜癌细胞凋亡的研究王丽双韩世愈朱莉蔡雁肖巍宋敬（哈尔滨医科大学附属第四医院黑龙江哈尔滨150001）（黑龙江省教育厅资助项目编号11511183）［摘要］目的研究光动力对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法1、不同浓度光敏剂对肿瘤细胞杀伤的差异，实验分组：（1）空白对照组（2）单纯激光照射组（3）光敏剂+激光照射组2、不同能量的激光对子宫内膜癌细胞杀伤的差异；激光能量10j/cm2、2CU/cm2、30j/cm2、40j/cm2。3、免疫组化法电镜分析子宫内膜癌细胞的超微结构改变。4、MTT比色分

2、析。结果MTT比色法检测显示，光敏剂无浓度依赖性，不随浓度的增加而作用增强。木实验选择光敏剂（HPD）浓度为lmg/ml（P?0.05k免疫组化法检测结果显示：光敏剂+激光照射组作用子宫内膜癌细胞细胞24h后细胞凋亡率明显增加，与其它二组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。结论光敏剂对子宫内膜癌细胞无浓度依赖性选择性，光动力对子宫内膜癌细胞的影响随着波忪、功率和时间而变化的，成正比关系。木实验选择最适波长630nm，输出能量10j/cm2,时间7S，光敏剂+激光照射组较其它二组子宫内膜癌细胞调亡率明显增加。［关键

3、词］光动力；子宫内膜癌；光敏剂子宫内膜癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，传统治疗方法以手术为主、化疗、放疗为辅。光动力治疗学或光动力疗法（photodynamicTherapy,PDT）是一种正在发展中的治疗恶性肿瘤的研究领域，目前光动力疗法在临床癌症治疗中己取得了令人瞩目的成就。可与放化疗同时进行，且具有一定的协同作用，有特异性高，仅对肿瘤细胞起杀伤作用，而对正常组织细胞则不产生作用，因而治疗中损伤甚微。对于子宫内膜癌患者，可经纤维内窥镜配合把光纤送入宫腔进行治疗。尤其是对不能耐受手术的患者是一种较好的治疗手段。对己浸润

4、或远处转移的肿瘤可将激光引进深部治疗或在单纯光动力治疗时结合综合治疗，能收到良好的效果。本文旨在研究探讨不冋浓度光敏剂和不冋能量的光动力对子宫内膜癌细胞凋亡的影响，进而为光动力在临床中的应用提供基础研宄和理论依据。1材料与方法1.1材料来源光敏剂Photofrine(HPD)100mg/20ml购自InternationalTumorsDiagnosisTreatmentResearchCenter。PRMI1640培养基，胎牛血清(FBS),碱磷酶标记山羊抗免lgG(H+L)工作浓度(1:500—1:1000)购自

5、ZSGB-BIO公司。BCIP/NBT底物显色试剂盒。来昔布200mg/粒。人子宫内膜癌细胞由哈医大二院实验中心提供并保存。DIOMED630光动力激光治疗仪由哈医大四院神经外科提供。1.2实验方法1.2.1细胞培养：将l×106个子宫内膜癌细胞接种在75cm2培养瓶内，在含10%胎牛血清的PRMI1640培养液中扩增子宫内膜癌细胞，并进行传代培养。制成单细胞悬液。计数、接种于6孔板和96孔板。1.2.2不同浓度的光敏剂对子宫内膜癌细胞增殖抑制实验：将制备好的细胞悬液计数，适当稀释后以每孔细胞浓度为2.8

6、×105接种于96孔板，加培养液200μl，置370C、5%CO2培养箱中培养24h。吸出培养液，用培养基进行不同浓度梯度倍比稀释所配制的光敏剂，每个浓度梯度设置3个复孔，每孔加培养液至200μl,使每孔光敏剂终浓度分别为10ug、20ug、30ug、40ug,同吋设置阴性对照组(PBS代替)，和空白对照组。置370C，5%CO2培养箱中静止培养24h后，向每孔加入1/10体积MTT(5mg)，继续孵育4h。4h后，小心吸去培养上清，每孔加入150ulDMSO,溶解细胞，用培养板震动器摇匀。用

7、酶标仪测定波长为492nm各孔0D吸收值，求出阴性对照及样品每个稀释度3孔测得的平均值。子宫内膜癌细胞抑制率按下述公式计算：抑制率=(阴性对照组0D-实验组0D)/(阴性对照组0D-空白组OD)×100%«根据各点的抑制率，绘制量效曲线：以光敏剂浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，microsoftexcel作图，观察光敏剂对子宫内膜癌细胞增殖抑制率。1.2.3.免疫组化法检测光动力对子宫内膜癌细胞凋死影响：取对数生长期的子宫内膜癌细胞，调整细胞浓度为5&timeS;103,铺载玻片及细胞于6孔培养板。实验分

8、组同前，加入，每组设5个复孔。PDT处理：用DIOMED630光动力激光治疗仪照射空白对照组（不加光敏剂，不用激光照射），单纯激光照射组（不加光敏剂，只用激光照射），光敏剂+激光照射组（加入10ug光敏剂，激光照射），给予波长630nm，距光斑3cm处输出能量功率10j/cm2垂直照射培养板7s,PDT后的细胞保存在370C、5%CO2培养箱中