人胎盘与脐动、静脉血造血干-祖细胞归巢相关黏附分子表达的研究论文

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1、人胎盘与脐动、静脉血造血干/祖细胞归巢相关黏附分子表达的研究论文.freelatopoieticstem/progenitorcell，HSPC）的归巢能力，采用机械法制备人胎盘组织单个细胞悬液，用流式细胞术分析胎盘组织及脐动、静脉血有核细胞中CD34+细胞及其亚群的含量.freeling-RelatedAdhesionMoleculesinHemato-poieticStem/ProgenitorCellsDerivedfromHumanPlacenta，UmbilicalCordArterialandVenousBloodAbstractTh

2、eaimofthisstudyingcapabilitiesofhematopoieticstem/progenitorcells(HSPCs)derivedfromhumanplacentatissues(PT).SinglecellsuspensionofhumanPTechanicalmethod.Theexpressionlevelsofhoming-relatedadhesionmolecules(HRAM)includingCD11a，CD49d，CD44，CD49e，CD62LandCD54onCD34+cellsandtheper

3、centagesofCD34+cellsandtheirsubpopulationsinnucleatedcells(NC)fromfreshhumanPT，umbilicalcordarterialblood(UCAB)andumbilicalcordvenousblood(UCVB)etry.TheresultsshoonganplacentaisrichinHSPC.Moreover，theexpressionlevelsofmostHRAMinCD34+cellsfromPTarehigherthanthosefromUCABandUCV

4、Borareclosetothem.ItsuggestedthatHSPCsderivedfromPTmighthavestrongerhomingcapabilitiesthanthosefromUCB.Keybilicalcordartery;umbilicalcordvein;hematopoieticstem/progenitorcell;adhesionmolecule;homing自发现脐带血富含造血干/祖细胞（hematopoieticstem/progenitorcell，HSPC）以来，脐血HSPC的移植已成为治疗骨髓造血功能衰

5、竭、恶性血液病、重症免疫缺陷、某些遗传病等疾病的重要手段［1-4］。但是，单份脐血所含的HSPC数量难以使一个成人获得造血干细胞重建。因此，寻找富含HSPC的新资源是非常必要的，国内已有学者发现胎盘组织中含有比脐带血更丰富的HSPC［5］。作为HSPC的成功移植，除要有足够数量的HSPC外，还要求HSPC能及时、高效地归巢至骨髓造血微环境“龛”，这对HSPC的植活与造血重建具有决定意义［6］。HSPC表面黏附分子的正常表达是干细胞移植时HSPC实现归巢及成功植入的关键。本研究中，我们利用了胎儿胎盘血循环的特点，即脐动脉血是由胎儿流到胎盘，而脐静脉

6、血则是由胎盘流回胎儿，分别测定脐动、静脉血及胎盘组织中HSPC的含量及三者CD34+细胞表面黏附分子的表达，初步探讨了胎盘HSPC的归巢能力，以期为人胎盘HSPC最终应用于临床移植提供有价值的实验依据。材料和方法主要试剂荧光标记的CD分子系列单克隆抗体，anti-humanCD34Cy-chrome购自美国PharMingen公司。FITC标记的CD38单克隆抗体、CD49d单克隆抗体和CD54单克隆抗体及PE标记的CD11a单克隆抗体均购自晶美公司，PE标记的CD62L及CD44单克隆抗体购自Biolegend公司，FITC标记的CD49e单克

7、隆抗体购自SBA公司。IMDM培养液为Sigma公司产品。胎盘和脐带血标本经知情同意后，无菌采集足月分娩胎儿的胎盘和脐动、静脉血标本6份，乙肝表面抗原（HBsAg）均为阴性。新生儿娩出后，在距胎儿脐部最近端结扎两处，从中间剪断脐带。胎盘残存于子宫内，并将距胎盘最近端脐带夹闭以防止血液流出。碘伏充分消毒脐带，用注射器分别穿刺脐动脉和脐静脉，收集脐带静脉血及动脉血各约5ml于收集管内，同时收集胎盘。脐动、静脉血分别用肝素抗凝（终浓度均为20U/ml），4小时内进行实验。胎盘细胞的制备用Hank’s液冲洗除去血块，剪碎胎盘组织，并反复冲洗，尽量除去血液

8、。将组织块浸泡于IMDM培养液，采用搓网法分离细胞，收集细胞悬液，用320目尼龙网过滤，115×g离心3分钟，收集细胞沉淀，悬浮于IMD