人胎盘组织源造血干-祖细胞的初步研究论文

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1、人胎盘组织源造血干/祖细胞的初步研究论文.freelanmatureplacentatissue-derivedmononuclearcells，hPTMNC)中CD34+细胞的体外增殖、分化能力，寻找新的造血干/祖细胞来源供临床应用，分别采用流式细胞术检测、造血干/祖细胞集落培养和体外无细胞因子长期培养的方法，测定胎盘组织源和脐血中的CD34+细胞及其亚群和集落形成单位的数量。结果表明：胎盘组织源CD34+细胞（2.74±0.61%）及其亚群CD34+/CD38-细胞（2.46±0.42%）、造血干/祖细胞集

2、落CFU-GM（186.90±24.52）和BFU-E（101.40±13.35）水平都较脐血CD34+细胞（1.73±032%）、CD34+/CD38-细胞（0.80±0.25%）、CFU-GM（136.90±25.15）、BFU-E(49.20±8.13)高；前者在体外无细胞因子培养条件下存活时间长.freelinaryStudyonHumanMaturePlacentaTissue-derivedHematopoieticStem/ProgenitorCellsAbstractClinicaltrans

3、plantationhasindicatedthatcordblood(CB)canbeusedinthehematopoieticreconstitutioninthechildren，butnotount.Thepresentstudyaimedtoexplorethecapabilityofproliferationanddifferentiationofthehematopoieticstem/progenitorcellsderivedfromhumanmatureplacentatissue(PT)

4、invitro，andtofindaneatopoietic/progenitorcellsforclinicaltransplantation.CD34+cellsinhumanmatureplacentatissuee-digestionmethodandfloetry.Alongculturesystemanmatureplacentatissue-derivedmononucleatedcellsandcordbloodmononuclearcells.Thenumberofnucleatedcells

5、berofCFCPThaveshooresurvivalabilitythanthecellsfromCBinthelong-termcellculturecondition；andthecellsfromPTincreasedby2times.Itisconcludedthattheplacentamaybeanotherhematopoieticorganinontogeny.Thecellsfromplacentaorejuvenile，andmaybefavorablesourceforclinical

6、stemcelltransplantation.Keyatopoieticstemcelltransplantation胎盘中含有大量的造血干细胞已被证实，脐血中的大量与造血相关的因子经研究证实来自胎盘［1，2］，这些造血相关因子可以有效地对脐血造血干细胞进行扩增和提高脐血造血干细胞的植入能力。这些研究结果说明，胎盘是造血干/祖细胞的适宜的生存环境。研究证明，小鼠胎盘参与了胚胎期的造血［3］，基于此我们对足月胎盘的造血干细胞的数量和功能进行了实验研究。材料和方法标本收集10份胎盘与其对应的脐血。脐血足月妊娠胎儿

7、娩出后立即将脐带结扎，对其消毒后穿刺脐静脉，收集于加了抗凝剂的采血袋中，在24小时内完成细胞分离。胎盘收集完脐血后，尽量保持胎盘的无菌状态，切割胎盘的胎儿面组织成0.5-1mm3大小组织块，用无菌的敷料包裹。8小时内进行酶消化以收集细胞。细胞因子和抗体重组人干细胞因子(rhSCF)、重组人粒-巨细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素3(rhIL-3)均为美国Immunex公司产品。抗CD34、CD38单克隆抗体为Peprotech公司产品；EPO购自Chemicon公司。主要试剂牛血清白蛋白(BSA

8、)、甲基纤维素、胰酶、EDTA、DMED、胎牛血清均购自美国Sigma公司。单个核细胞的制备脐血细胞（CBC）脐血标本中加入等量的PBS液稀释后缓慢地加入到淋巴细胞分离液(Ficoll-Hypague，比重1.077；脐血∶分离液为2∶1)面上，常温条件下1000×g离心30分钟，吸取中间层单个核细胞(MNC)；用PBS液稀释为106/ml。胎盘组织源细胞（PTC）无菌条件下剪切胎盘胎