胎盘造血干细胞库构建的初步研究

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1、工程硕士学位论文胎盘造血干细胞库构建的初步研究作者姓名黄海军工程领域生物工程校内指导教师凌飞教授校外指导教师张秀清教授所在学院生物科学与工程学院论文提交日期2018年03月11日ThepreliminarystudyfortheplacentahematopoieticstemcellbankADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：HaijunHuangSupervisor：Prof.FeiLingProf.XiuqingZhangSou

2、thChinaUniversityofTechnologyGuangzhou,China分类号：Q813学校代号：10561学号：201320209931华南理工大学硕士学位论文胎盘造血干细胞库构建的初步研究作者姓名：黄海军申请学位级别：工程硕士工程领域名称：生物工程校内指导教师姓名、职称：凌飞教授校外指导教师姓名、职称：张秀清教授论文形式：产品研发工程设计应用研究工程/项目管理调研报告研究方向：细胞论文提交日期：2018年03月11日论文答辩日期：2018年03月17日学位授予单位：华南理工大学学

3、位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：刘建忠委员：张菊梅王菊芳关溯李杉摘要造血干细胞治疗是目前最成熟的一门干细胞移植医疗技术，已经证明可以治疗多种血液性疾病，如白血病、血友病、血癌等。目前临床应用的造血干细胞主要来源于成年人的外周血、骨髓和婴儿出生后的脐带血，但是有许多原因限制了这些来源物的造血干细胞临床使用。因此寻找含量更充足的造血干细胞来源物成为目前造血干细胞临床使用急需解决的问题。近年来，研究发现胎盘中含有丰富的造血干细胞，其特征与脐带血中造血干细胞相同，可以作为临床使用的造血干细胞理想的新来

4、源。本研究采用灌洗和酶消化相结合作用的方法从20份胎盘中分离出有核细胞及CD34+造血干细胞，并拟构建胎盘造血干细胞库对分离出来的细胞进行长期低温保存。得到结果如下：1.通过灌洗收集得到的有核细胞平均数为（16.82±6.08）×108，而追加的酶消化还可以再分离出有核细胞平均数为（7.79±3.13）×108，占到本实验分离得到有核细胞平均总数的32%。说明了灌洗的方法并不能够有效分离出胎盘有核细胞，在灌洗的基础上追加酶消化来分离胎盘中剩余的有核细胞是必要的。2.从山东脐带血库2001年发布的文章可

5、知，胎盘中收集得到的有核细胞和CD34+造血干细胞的平均数分别为（24.65±6.50）×108和（22.60±7.29）×106，是脐带血中收集得到有核细胞和CD34+造血干细胞的平均数至少2倍以上。对从胎盘中分离得到的造血干细胞进行体外培养时，胎盘来源的造血干细胞在体外培养中具有良好的集落形成能力，即具有良好的造血分化和增殖能力。结果说明了胎盘造血干细胞和脐带血造血干细胞一样符合临床使用的要求，完全符合构建造血干细胞库要求，为建立胎盘造血干细胞库提供了实验依据。3.对18份在拟构建的胎盘造血干细胞

6、库经过长期超低温保存的胎盘有核细胞复苏后进行细胞活率检测和细胞增殖检测，发现冻存的胎盘有核细胞复苏后的活性基本都维持在80%以上，符合目前脐带血库对冻存后细胞活性的要求；而复苏后的胎盘有核细胞能够在有利于有核细胞生长的培养体系中增殖，说明复苏后的有核细胞并没有发生生物学特征改变。因此，本研究方法拟建立的胎盘造血干细胞库对胎盘有核细胞的长期保存是可行可靠的。综上所述，说明了胎盘中含有丰富的造血干细胞，从胎盘中分离得到的造血干细胞I可以作为脐带血造血干细胞的可靠新来源，较好解决脐带血中临床应用的造血干细胞

7、数量不足的问题，建立起类似于脐带血库的胎盘造血干细胞库具有极其重要的意义。最后本研究展望了胎盘造血干细胞库的建库要求及运行情况。关键词：细胞移植；胎盘；脐带血；造血干细胞；细胞库IIAbstractHematopoieticstemcelltherapy,whichhasbeenproventobeabletocuremanyblooddiseasesuchasLeukemia,hemophiliaorbloodcancer,isthematureststemcelltransplantationme

8、dicaltechnology.ThestemcellsusedinclinicmainlycomefromthePeripheralblood,marrowofadultsandtheumbilicalcordoftheburnedinfants,however,therearemanyreasonsthatlimittheclinicaluseofhematopoieticstemcellsfromthesesources.Therefore,sea