脐血cd34+造血干-祖细胞基因表达图谱的研究的论文

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1、脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究的论文【摘要】目的：通过脐血cd34+造血干/祖细胞的基因表达分析，理解造血干/祖细胞生物学特性。方法：利用minimacs免疫磁珠法从脐血细胞中分离cd34+造血干/祖细胞，提取总rna，用smartpcr技术从微量rna中扩增产生足够量的cdna用于高密度点阵膜分析检测cd34+造血干/祖细胞表达的基因。结果：在所检测的588个基因中，发现63个基因具有显著的表达水平，其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论：对理解脐血干/祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生

2、物学基础。【关键词】脐血cd34+造血干/祖细胞smartpcr高密度点阵膜　　geneexpressionanalysisofprimaryhumancd34+hematopoieticstemandprogenitorcellsfromumbilicalcordblood　　liqunliang,caihaibo,liuqiatopoieticstemandprogenitorcells(hspcs)derivedfromumbilicalcordblood(ucb).methods:cd34+hspcsfreshucbbyminimacsseperation.smartpcr

3、technologyployedtoamplifycdnafromisolatedrna.hybridizationexperimentsedtodeterminegeneexpressionpatternofcd34+hspcsusingatlascdnaexpressionarraycovering588genes.results:thedatafromgeneexpressionanalysisrevealedthat63genesainlyinproliferation,differentiation,stressresponses,apoptosis,transcriptionre

4、gulation,andcellcycle.conclusion:thisstudygivessomeneofhspcs,anditmaybehelpfultounderstandbiologicalpropertiesandimprovemanipulationofhematopoieticcells.　　［keybilicalcordblood；cd34+hematopoieticstemandprogenitorcells；smartpcr；cdnaarray　　造血干细胞具有自我更新和分化成所有血细胞的潜能，对维持造血功能的动态平衡起着至关重要的作用。.鉴定造血干/祖细胞的基因表达

5、图谱对认识造血发育和调控具有重要的意义，为改善其临床应用以及指导体外培养提供理论基础。因此研究cd34+造血干/祖细胞的基因表达图谱成了人们探索的热点。可能是由于脐血干细胞数量少的缘故，致使目前只有极少的相关报道。mao等［1］通过大量收集脐血和pcr方法将cd34+造血干/祖细胞表达的基因反转录成cdna克隆到λzapⅱ载体中进行测序，所得到的ests(expressedsequencetags)与公共基因库对比分析，发现855个已知基因表达。这些基因主要涉及造血、细胞分裂、细胞信号、细胞结构、细胞防御反应、基因表达以及代谢等，为造血干细胞或其他干细胞系统的基因表达分析提供了借鉴作用。在此

6、，本实验采用smartpcr技术结合高密度点阵膜分析策略对脐血cd34+造血干/祖细胞的基因表达进行了研究，所得结果对造血干细胞生物学特性的理解具有启示作用。　　1材料与方法　　1.1cd34+造血干/祖细胞的分离纯化采用minimacs免疫磁性吸附柱分离装置和cd34+造血干/祖细胞富集试剂盒（milienyibiotech公司），按说明进行cd34+造血干/祖细胞的分离纯化。为了提高cd34+造血干/祖细胞的纯度，将第一遍收获的cd34+造血干/祖细胞再用一根新的minimacs吸附柱进行第二轮分离纯化，经过两轮分离富集得到的cd34+造血干/祖细胞纯度高达95%以上。　　1.2总rn

7、a提取用trizol（invitrogen）试剂提取从少量cd34+造血干/祖细胞中提取总rna，采用rq1rnasefreednase（promega公司）去除rna样品中混杂的少量dna，所得样品可直接进行反转录或添加rnase抑制剂于-70℃保存。　　1.3smartpcr扩增cdna由于rna样品极少，因此采用smartpcr技术扩增生成足够量的cdna用于高密度点阵膜分析。首先，利用smart