肝细胞癌中chfr、ednrb和3-ost-2基因异常甲基化的研究

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1、肝细胞癌中CHFR、EDNRB和3?OST?2基因异常甲基化的研究谢坤朱立新耿小平李晓明熊奇如孙昀刘念　　【摘要】目的研究肝细胞癌中细胞有丝分裂前期检查点(checkpointinyl3?O?sulfotransferase?2,3?OST?2)基因启动子区异常甲基化状态及其临床意义。方法收集癌组织及相应癌旁组织标本40例，以及14例肝血管瘤患者肝脏和2例肝移植供肝标本，并排除乙肝病毒感染和肝硬化。使用甲基化特异性PCR反应检测上述标本中CHFR、EDNRB和3?OST?2基因的甲基化状态。结果CHFR基因在癌组织和癌旁组织的甲基化率分别为52.5%和27.5%，癌组织中的甲

2、基化率高于癌旁组织(P<0.05)。EDNRB基因在癌组织和癌旁组织中的甲基化率都为27.5%。3?OST?2基因在癌组织中甲基化率为12.5%，癌旁组织没有发现甲基化。16例正常肝组织中没有发现上述3种基因的异常甲基化。癌组织中CHFR基因甲基化与非甲基化患者相比，男性多于女性。癌旁组织中EDNRB基因甲基化患者肿瘤的包膜出现率低于非甲基化患者。癌组织中3?OST?2基因甲基化患者的年龄和肿瘤直径大于非甲基化患者。结论肝细胞癌中CHFR基因、EDNRB基因启动子的高甲基化是普遍现象，而3?OST?2基因启动子甲基化率较低。【关键词】肝肿瘤；基因；DNA甲基化【Abst

3、ract】ObjectiveTostudystatusofthepromoterhypermethylationofcheckpointinyl3?O?sulfotransferase?2(3?OST?2)genesinhepatocellularcarcinomaandobserveitsclinicalsignificance.MethodsMethylation?specificPCRotermethylationofCHFR,EDNRBand3?OST?2genesinspecimensfrom40casesa(HCC),livertissuesfrom14angio

4、maand2donorlivers.ResultsThefmethylationratesofCHFR,EDNRBand3?OST?2ortissues.Normalliverhadnomethylationof3genes.MethylationofCHFRorefrequentinHCCtissuesthanthatinnon?tumorlivertissues.MethylationofCHFRinmalesorethanthatinfemales.Thecasesethylationof3?OST?2geneeterofcarcinomathanthoseoterme

5、thylationofCHFRandEDNRBgenesisamoneventinHCC,otermethylationof3?OST?2isratherloa;Genes;DNAmethylation我国属肝癌高发区，每年新发病例约占全球45%。对于肝癌临床缺乏有效的预防、检测及治疗手段，故其治愈率低下，预后恶劣。有关DNA甲基化与肝癌发生发展的关系日渐受到人们的重视。我们检测了40例肝细胞癌肿瘤标本、相应的癌旁组织、16例正常肝组织标本及4例肝癌细胞株中有丝分裂前期检查点(checkpointinyl3?O?sulfotransferase?2,3?OST?2)基因的甲基

6、化状态，并结合临床资料进行了分析，旨在探讨这3种基因异常甲基化与肝癌发病的遗传机制。1材料与方法1.1临床标本及资料40例肝细胞癌组织及癌旁组织(距癌肿边缘2cm以远组织)标本均来自安徽医科大学第一附属医院普外科2003年8月至2005年4月间行手术治疗的肝细胞癌患者。所有诊断均经过病理检查证实，并填写相关资料登记表。40例患者中男36例，女4例；平均年龄52.1岁(12～69岁)。HBsAg阳性32例，阴性8例。伴肝硬化患者33例。另有14例同期肝海绵血管瘤患者的正常肝组织及2例肝移植供肝标本作为正常对照组。16例正常肝组织均证实无乙肝病毒感染和肝硬化。所有标本取下后立即放

7、于-80℃冰箱内保存备用。4种肝癌细胞株(HepG2、HEP3B、HUH7和SK?HEP?1)作为参照组。1.2试剂及材料肝癌及癌旁组织DNA提取使用德国Qiagen公司DNA提取试剂盒，DNA修饰使用美国Chemicon公司亚硫酸氢钠修饰试剂盒；热启动TaqGold酶、MgCl2(25mmol/L)、10×聚合酶链反应缓冲液等PCR反应试剂购自美国Roche公司；琼脂糖(Agarose?1000)购自西班牙Inviotrogen公司。1.3实验方法1.3.1冷冻组织DNA提取：取-80℃低温保存的冷冻