槲皮素对sgc7901胃癌细胞生长及hsp70和egfr表达的影响

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1、槲皮素对SGC7901胃癌细胞生长及HSP70和EGFR表达的影响：向廷秀，陶小红，姜政，王丕龙，谯敏【摘要】目的观察槲皮素对胃癌细胞SGC7901生长及HSP70和EGFR的影响。方法以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化，免疫组化检测HSP70和EGFR的表达。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC7901细胞增殖的作用明显，且呈浓度和时间依赖性，槲皮素处理48h后的IC50为14.12μmol/L。形态学检测显示出细胞

2、凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10-20μmol/L的槲皮素处理，SGC7901细胞周期阻滞于G0/G1期，经10μmol/L槲皮素处理的SGC7901下调HSP70和EGFR蛋白的表达。结论槲皮素能抑制胃癌细胞的生长,呈时间剂量依赖性，能诱导SGC7901发生凋亡，使细胞周期阻滞于G0/G1期，抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调HSP70和EGFR的表达有关。【关键词】槲皮素；胃癌细胞；凋亡；HSP70；EGFR　　Effectsofquercetinonproliferation

3、ofgastriccancerlines　SGC7901andtheexpressionofHSP70andEGFR　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofquercetinonhumangastriccancerlinesSGC7901andontheexpressionofheatshockprotein70(HSP70)andepidermalgroberofviablecellsicroscopy.Cellcycleetry.HSP7

4、0andEGFRexpressionmunocytochemistry.ResultsQuercetinhadasignificantinhibitiononthegroangastriccancerlineSGC7901invitroinaconcentrationdependentmanner.TheIC50ol/Lafterexposuretoquercetinfor48h.Electronicmicroscopyprovidedevidencethatapoptosisoccurre

5、dinthegastriccancercellsoftreatmentgroups.FCManalysisshomunocytochemicalstudyshool/Lquercetin.ConclusionDosedependentinhibitoryeffectsofquercetinonthegroangastriccancercelllineareremarkable.QuercetincaninduceapoptosisofSGC7901andkeepthecellcycleatG0

6、/G1phasefromdoalgroalgroa公司产品，将其用二甲基亚砜溶解(小于250g/L)后-20℃保存备用。用前加RPMI1640稀释至使用浓度。HSP70单抗和EGFR多抗购于中山生物工程公司。　　1.2细胞培养及处理人胃癌细胞株SGC7901引种于重庆医科大学病理生理学教研室,培养于含10%(体积分数)小牛血清、100u/mL链霉素、100μg/mL青霉素和pH7.2的PRMI1640液中，培养条件为37℃饱和湿度、体积分数为5%CO2孵箱中，1-3d换液一次，癌细胞为贴壁生长。

7、取对数生长期细胞，调浓度为5×104个/mL，接种于培养瓶，进行试验。将槲皮素以5、10、20、40、80μmol/L的终浓度加入培养液中，同时设不加药的细胞培养液为对照组。　　1.3台盼蓝拒染试验不同浓度槲皮素处理的细胞分别于24、48、72、96h经4g/L台盼蓝染液染色后用血球计数仪于光镜下计数，死细胞被染成蓝色，活细胞则不被染色，计数活细胞。　　细胞抑制率(%)=[1-(实验组活细胞数/对照组活细胞数)]×100%　　1.4电子显微镜观察细胞凋亡情况取对数生长期的胃癌细胞用1g/L的胰酶

8、消化后调成1×106细胞浓度，PBS洗涤2遍，3%(体积分数)戊二醛固定4h，质量浓度为10g/L锇酸后固定1h，体积分数为50%、70%、90%、100%丙酮梯度脱水，618环氧树脂包埋，LKBNOVa切片，厚度500Nm，醋酸铀、枸橼酸铅双染色法染色，电镜下观察。　　1.5流式细胞仪观察细胞周期以10μmol/L、20μmol/L的槲皮素处理细胞48h后，收集细胞制成单细胞悬液，PBS洗两次，制备的单细胞悬液，用70%(体积分数)冰乙醇固定。染色前用PBS进行离心沉淀，去除乙醇，加10g/