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时间:2018-05-02
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1、P物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用摘要:目的探讨P物质(SP)在嗜酸粒细胞(Eos)活化中的作用及机制.方法以非连续性Percoll密度梯度分离法分离哮喘患者外周血Eos,了解SP对Eos过氧化物酶(EPO)活性和脱颗粒的调节作用,并以苔盼蓝拒染法评价SP对Eos存活时间的影响.用改良Boyden法,测定SP对Eos的趋化活性,并观察血小板激活因子(PAF)对SP预处理Eos的趋化作用.结果SP能显著增强EPO活性,刺激Eos脱颗粒,且与PAF有协同性,但不能延长Eos的存活时间.神经激肽-1(NK1)受体拮抗剂GR71251和磷酯酶C(PLC)抑制剂新霉素能阻断
2、SP的上述作用.SP对Eos有显著趋化作用,其EC50为1×10-14~1×10-12mol・L-1,最大趋化浓度为1×10-10mol・L-1,此后随浓度的增加,其趋化作用降低.PAF对Eos的趋化作用因SP预处理Eos而显著强化(P<0.01),NK1受体拮抗剂GR71251对SP的预处理作用有显著的阻断效应.结论SP作用于Eos胞膜上的NK1受体,经百日咳杆菌毒素(PTX)敏感型G蛋白,活化磷酯酶C从而激活Eos.同时SP还是一种Eos的趋化介质,与PAF有协同作用,NK1受体介导了这一协同效应. KeyaAbstract:AIM
3、ToinvestigatetheeffectofsubstanceP(SP)ontheactivationofeosinophils(Eos).METHODSEosperipheralbloodofasthmaticsub-jectsusingadiscontinuousPercolldensitygradients.Theef-fectofSPontheactivationofEoseasur-ingtheactivityofeosinophilperoxidase(EPO)inEosandde-granulationofEos.EffectofSPonthesurvi
4、valofEosotaxisbySPandplatelet-activatingfactor(PAF)odifiedBoyden’schambertechnique.Inducedchemotaxisofpre-treatedEosulatethedegranulationofEossignificantly.Inthepresentstudy,onstratedasynergisticeffectofSPontheactivationofEosbyplateletactivatingfactor(PAF).ButtheroleofSPcouldbeattenuatedm
5、arkedlybyantagonistforNK1receptor,GR71251,inhibitorofphospholipaseC(PLC),andneomycine.HoulatedEosmigrationinvitrool・L-1,andmaxi-maleffectol・L-1.TheeffectofSPotacticresponsetoPAF(10-7mol・L-1)ol・L-1).PotentiatingeffectofSPonPAF-inducedEoschemotaxisaybecou-pledthe
6、specificreceptor(NK-1)onEos,andactivatePLCandtheninducethedegranulationofEos.Inaddition,SPisalsoachemotacticmediatorofhumanEosandsynergisticycine)、血小板活化因子(PAF)均为Sigma公司产品,Percoll系瑞典pharmacia产品,酶联分光光度计系第四军医大学寄生虫学教研室研制,微孔滤膜为上海新亚净化器材厂生产. 1.2方法 1.2.1人Eos的分离和纯化取哮喘患者静脉血30mL,按文献[1]分离Eos. 1.2.
7、2SP对Eos过氧化物酶(EPO)活性和脱颗粒的调节作用 1.2.2.1SP对EosEPO活性的影响取1×109・L-1Eos悬液45μL加入55孔反应板中.在不同浓度SP处理组,每孔加入5μL不同浓度的SP,使其终浓度分别为1×10-10~1×10-6mol・L-1.对照组每孔加入生理盐水5μL.置37℃孵育2h.按文献[2]报道的方法测定EPO活性,用酶联分光光度计,测A492nm值,以A492nm值表示活性.在GR71251处理组中于加入SP前,以GR71251(终浓度为1×10-7mol&
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