p物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用论文

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1、P物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用论文.freelolL-1，最大趋化浓度为1×10-10molL-1，此后随浓度的增加，其趋化作用降低.PAF对Eos的趋化作用因SP预处理Eos而显著强化（P0.01），NK1受体拮抗剂GR71251对SP的预处理作用有显著的阻断效应.结论SP作用于Eos胞膜上的NK1受体，经百日咳杆菌毒素（PTX）敏感型G蛋白，活化磷酯酶C从而激活Eos.同时SP还是一种Eos的趋化介质，与PAF有协同作用，NK1受体介导了这一协同效应.KeyaAbstract:AIMToinvestigatetheeffectofsubstance

2、P（SP）ontheactivationofeosinophils（Eos）.METHODSEosperipheralbloodofasthmaticsub-jectsusingadiscontinuousPercolldensitygradients.Theef-fectofSPontheactivationofEoseasur-ingtheactivityofeosinophilperoxidase（EPO）inEosandde-granulationofEos.EffectofSPonthesurvivalofEosotaxisbySPandplatelet

3、-activatingfactor（PAF）odifiedBoyden’schambertechnique.Inducedchemotaxisofpre-treatedEosulatethedegranulationofEossignificantly.Inthepresentstudy，onstratedasynergisticeffectofSPontheactivationofEosbyplateletactivatingfactor（PAF）.ButtheroleofSPcouldbeattenuatedmarkedlybyantagonistforNK1

4、receptor，GR71251，inhibitorofphospholipaseC（PLC），andneomycine.HoulatedEosmigrationinvitroolL-1，andmaxi-maleffectolL-1.TheeffectofSPotacticresponsetoPAF（10-7molL-1）olL-1）.PotentiatingeffectofSPonPAF-inducedEoschemotaxisaybecou-pledthespecificreceptor（NK-1）onEos，andactivatePLCandthenindu

5、cethedegranulationofEos.Inaddition，SPisalsoachemotacticmediatorofhumanEosandsynergisticycine）、血小板活化因子（PAF）均为Sigma公司产品，Percoll系瑞典pharmacia产品，酶联分光光度计系第四军医大学寄生虫学教研室研制，微孔滤膜为上海新亚净化器材厂生产.1.2方法1.2.1人Eos的分离和纯化取哮喘患者静脉血30mL，按文献［1］分离Eos.1.2.2SP对Eos过氧化物酶（EPO）活性和脱颗粒的调节作用1.2.2.1SP对EosEPO活性的影响取1×109

6、L-1Eos悬液45μL加入55孔反应板中.在不同浓度SP处理组，每孔加入5μL不同浓度的SP，使其终浓度分别为1×10-10～1×10-6molL-1.对照组每孔加入生理盐水5μL.置37℃孵育2h.按文献［2］报道的方法测定EPO活性，用酶联分光光度计，测A492nm值，以A492nm值表示活性.在GR71251处理组中于加入SP前，以GR71251（终浓度为1×10-7molL-1），孵育15min.20℃5000rmin-1离心5min，弃上清，以Hank’s液洗涤管底细胞2次，重悬于45μL的Hank’s液中，以后步骤同上述.每一组测6孔.1.2.2.2

7、SP对脱颗粒的影响参照文献［3］进行.Eppendorf管中加入1×109L-1Eos悬液180μL和SP20μL（终浓度为1×10-10～1×10-6molL-1）.对照组:在不同浓度SP处理组每管加入20μL生理盐水.置37℃孵育2h.然后以20℃5000rmin-1离心5min，弃上清.用Hank’s液轻轻洗涤管底细胞团2次.重悬于Hank’s液200μL中，超声粉碎仪震荡5min，按文献［2］测EPO活性.在GR71251处理组中，于加入SP前，以GR71251（终浓度为1×10-7molL-1），孵育15min.20℃5000rmin-1离心5min，弃

8、上清，以H