p物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用

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1、P物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用摘要:目的探讨P物质（SP）在嗜酸粒细胞（Eos）活化中的作用及机制.方法以非连续性Percoll密度梯度分离法分离哮喘患者外周血Eos，了解SP对Eos过氧化物酶（EPO）活性和脱颗粒的调节作用，并以苔盼蓝拒染法评价SP对Eos存活时间的影响.用改良Boyden法，测定SP对Eos的趋化活性，并观察血小板激活因子（PAF）对SP预处理Eos的趋化作用.结果SP能显著增强EPO活性，刺激Eos脱颗粒，且与PAF有协同性，但不能延长Eos的存活时间.神经激肽-1（NK1）受体拮抗剂GR71251和磷酯酶C（PLC）抑制剂新霉素能阻断

2、SP的上述作用.SP对Eos有显著趋化作用，其EC50为1×10-14～1×10-12mol・L-1，最大趋化浓度为1×10-10mol・L-1，此后随浓度的增加，其趋化作用降低.PAF对Eos的趋化作用因SP预处理Eos而显著强化（P<0.01），NK1受体拮抗剂GR71251对SP的预处理作用有显著的阻断效应.结论SP作用于Eos胞膜上的NK1受体，经百日咳杆菌毒素（PTX）敏感型G蛋白，活化磷酯酶C从而激活Eos.同时SP还是一种Eos的趋化介质，与PAF有协同作用，NK1受体介导了这一协同效应.　　KeyaAbstract:AIM

3、ToinvestigatetheeffectofsubstanceP（SP）ontheactivationofeosinophils（Eos）.METHODSEosperipheralbloodofasthmaticsub-jectsusingadiscontinuousPercolldensitygradients.Theef-fectofSPontheactivationofEoseasur-ingtheactivityofeosinophilperoxidase（EPO）inEosandde-granulationofEos.EffectofSPonthesurvi

4、valofEosotaxisbySPandplatelet-activatingfactor（PAF）odifiedBoyden’schambertechnique.Inducedchemotaxisofpre-treatedEosulatethedegranulationofEossignificantly.Inthepresentstudy，onstratedasynergisticeffectofSPontheactivationofEosbyplateletactivatingfactor（PAF）.ButtheroleofSPcouldbeattenuatedm

5、arkedlybyantagonistforNK1receptor，GR71251，inhibitorofphospholipaseC（PLC），andneomycine.HoulatedEosmigrationinvitrool・L-1，andmaxi-maleffectol・L-1.TheeffectofSPotacticresponsetoPAF（10-7mol・L-1）ol・L-1）.PotentiatingeffectofSPonPAF-inducedEoschemotaxisaybecou-pledthe

6、specificreceptor（NK-1）onEos，andactivatePLCandtheninducethedegranulationofEos.Inaddition，SPisalsoachemotacticmediatorofhumanEosandsynergisticycine）、血小板活化因子（PAF）均为Sigma公司产品，Percoll系瑞典pharmacia产品，酶联分光光度计系第四军医大学寄生虫学教研室研制，微孔滤膜为上海新亚净化器材厂生产.　　1.2方法　　1.2.1人Eos的分离和纯化取哮喘患者静脉血30mL，按文献［1］分离Eos.　　1.2.

7、2SP对Eos过氧化物酶（EPO）活性和脱颗粒的调节作用　　1.2.2.1SP对EosEPO活性的影响取1×109・L-1Eos悬液45μL加入55孔反应板中.在不同浓度SP处理组，每孔加入5μL不同浓度的SP，使其终浓度分别为1×10-10～1×10-6mol・L-1.对照组每孔加入生理盐水5μL.置37℃孵育2h.按文献［2］报道的方法测定EPO活性，用酶联分光光度计，测A492nm值，以A492nm值表示活性.在GR71251处理组中于加入SP前，以GR71251（终浓度为1×10-7mol&