草莓乙烯受体Etr1基因克隆及其植物表达载体的构建.pdf

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1、分类号：墨鳗§：2密级：公珏单位代码：!QQ堑学号：2QQ墨!垒垒草莓乙烯受体Etrl基因克隆及其植物表达载体的构建StrawberryEthyleneEtrlGeneCloningandItsPlantExpressionVectorConstruction学位申请人：汪丽指导教师：马俊莲教授张子德教授学科专业：食品科学学位类别：工学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其

2、他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑韭盔些叁堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：汪丽签字日期：≥D11年石月乡日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰堡壅些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在

3、解密后适用本授权书)学位论文作者签名：；王码签字日期：卅l1年6月；日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：新躲豸侈涉签字日期：∞11年6月弓日电话：邮编：摘要草莓是一种经济价值很高的果品，但果实采后极易软化腐烂，不耐贮运，造成很大的经济损失。乙烯受体Etrl基因在草莓果实成熟阶段表达较多，可能与果实的成熟密切相关。深入研究Etrl基因功能将有助于揭示乙烯受体与非跃变型果实成熟的关系，从而为采用生物技术手段提高草莓果实的贮运性能奠定基础。为此，本研究以全明星草莓基因组DNA为模板，PCR扩增到了草莓乙烯受体Etrl基因片段，构建

4、了该基因的反义和RNA干扰植物表达载体。主要结果如下：(1)根据已发表的Chandlar草莓乙烯受体Etrl的保守氨基酸序列，设计了一对特异性引物，PCR扩增得到一个长617by的基因片段，序列分析表明该片段与GenBank中Chandlar草莓Etrl基因核苷酸序列及所编码的氨基酸序列同源性高达98％，无内含子序列。说明克隆到的片段是全明星草莓Etrl基因片段。(2)将克隆到的全明星草莓Etrl核苷酸序列反向克隆到了pBl221质粒的XbaI-BamHI酶切位点之间，构建成中间表达载体pBl221．anti-Etrl。用SmaI和H

5、indlII酶切构建好的中间载体pBl221．anti-Etrl和pBll21质粒，切下中间载体质粒上的CaMV35S启动子和Etrl的反义序列，将其定向插入到切除CaMV35S启动子的pBll21质粒中，构建成反义表达载体pBIl21．anti．Etrl。(3)将Etrl的序列正向插入到中间载体pBl221质粒的BamHI和SmaI酶切位点之间，构建成中间表达载体pBl221．sense-Etrl。用EcoRI和BamHI酶切构建好的反义表达载体pBll21．anti．Etrl和中间载体pBl221．sense-Etrl。切下中间载

6、体质粒上的GusA、NOS终止子和正义序列，将其插入到切除了GusA和NOS终止予的pBIl21．anti-Etrl质粒中，构建成RNAi植物表达载体pBIl21．胁J．RNAi。(4)利用冻融法将pBll21．anti-Etrl、pBll21出，．J．RNAi两个植物表达载体转化到农杆菌LBA4404中，经特异性引物对转化菌液的PCR扩增，证实表达载体已转入农杆菌。●关键词：草莓；乙烯受体；Etrl基因；植物表达载体；RNA干扰Strawberry(FragariaananassaDuch．)Etrlgeneanditsplante

7、xpressionvectorconstructiOnAuthor：WangLiMajor：FoodScienceSupervisor：Prof．MaJunlianPm￡ZhangzideAbstractCultivatedstrawberry(FragariaxananassaDueh．)isafruitcropspecieswithhi曲values，butitsfleshyfruits，whicharegettinglessfinnduringprogressiveripening,areliabletoapost-harves

8、tdeteriorationthatimpairstheirpreservationandcausesgreateconomiclosses．FurtherresearchongenefunctionofEtrlmayd